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【產(chǎn)品概述】ALyS505N-0 無血清細(xì)胞培養(yǎng)基是專為細(xì)胞免疫治療研究而開發(fā)，不含有任何動物蛋白質(zhì)成分，含有重組或醫(yī)療級人類蛋白質(zhì)的無血清細(xì)胞培養(yǎng)基。對人類外周血 T 淋巴細(xì)胞具有高增殖性，是細(xì)胞免疫治療用首選培養(yǎng)基。

【產(chǎn)品用途】適用于人類外周血單核細(xì)胞誘導(dǎo)的 CIK、DC、LAK、CTL 等 T 細(xì)胞的擴(kuò)增與活化，僅供科研使用。

【產(chǎn)品規(guī)格】1000ml/瓶

【標(biāo)本處理】

1、血液分離

  1.1 將血液采集至含有肝素鈉抗凝的采血管；

  1.2 在兩支裝有 15ml 淋巴細(xì)胞分離液的離心管上，分別小心地倒上 20～30ml 血液， 室溫下，800xg 離心 20 分鐘，緩升緩降; 

2、制備熱滅活人類血漿

    2.1 用無菌吸管采集上層的血漿，收集至離心管中，56℃加熱血漿 30 分鐘，室溫下， 1200xg 離心 10 分鐘；

    2.2 用吸管將上清液采集至新的離心管，4℃保存，直至使用前取出; 3、制備 PBMC

  3.1 用吸管將第 2 層單個核細(xì)胞收集至新的離心管，加入 PBS 35ml 稀釋細(xì)胞懸液， 500xg 離心 10 分鐘；

3.2 移除上清液，加入 PBS 35ml 稀釋細(xì)胞懸液，混勻，取 100μl 細(xì)胞懸液計數(shù)， 余下懸液 500xg 離心 10 分鐘，棄上清。

【使用方法】

ALyS505N-0 無血清細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng) CIK 細(xì)胞：

 1、在 T75cm2 的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中加入 50 ml 含 10 滅活自體血漿細(xì)胞培養(yǎng)液，重懸細(xì)胞調(diào)整細(xì)胞密度大于 1.5x106 cells/ml，并添加 IFN-γ（1000IU/ml），置于 5  CO  、 37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

  2、24h 后，培養(yǎng)瓶中加入 Lymactin-（T；50μg）、IL-2（1000IU/ml）、IL-1α（100IU/ml），繼續(xù)培養(yǎng)

  3、第 3 天，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到 T175cm2 培養(yǎng)瓶中，加入 50ml ALyS505N-0 培養(yǎng)基含 IL-2（1000IU/ml) ，置于 5 CO2、37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)；

4、第 5 天，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到 2 個 A-1000N 培養(yǎng)袋中擴(kuò)大培養(yǎng)，每個 A-1000N 培養(yǎng)袋加入 100ml ALyS505N-0 培養(yǎng)基含 IL-2(1000IU/ml），置于 5  CO2、37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)；

5、第 7～11 天根據(jù)細(xì)胞密度、細(xì)胞生長狀態(tài)及培養(yǎng)基顏色變化補(bǔ)加 1000ml、1400ml ALyS505N-0 培養(yǎng)基含 IL-2(700IU/ml），置于 5  CO2、37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

6、培養(yǎng) 14 天后回收細(xì)胞，取樣品檢測細(xì)胞活性、數(shù)量、表型、真菌、細(xì)菌、支原體、內(nèi)毒素等指標(biāo)。

【技術(shù)參數(shù)】