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1培養(yǎng)細(xì)胞時應(yīng)使用5%或10%CO2? 一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為PH緩沖系統(tǒng),而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時應(yīng)使用的CO2濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時。則應(yīng)使用5%CO2培養(yǎng)細(xì)胞。(配置培養(yǎng)基時,如果攪動過多會使 NaHCO3轉(zhuǎn)變?yōu)闅怏w而丟失,使培養(yǎng)基的PH緩沖能力下降。)
2何時須更換培養(yǎng)基 視細(xì)胞生長密度而定,撲滿皿或瓶即可更換培養(yǎng)基即可。
3 培養(yǎng)基中是否須添加抗生素?
除于特殊篩穿系統(tǒng)中外,一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下,培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素。
4欲將一般動物細(xì)胞離心下來,其離心速率應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速? 欲回收動物細(xì)胞,其離心速率一般為300g(約1000rpm),5-10分鐘,過高之轉(zhuǎn)速,將造成細(xì)胞死亡。
5細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基之成份為何? 動物細(xì)胞冷凍保存時最長使用的冷凍培養(yǎng)基是含5-10%DMSO和90-95%原來細(xì)胞生長用之新鮮培養(yǎng)基均勻混合之。注意:由于DMSO稀釋時會放出大量熱能,故不可將DMSO直接加入細(xì)胞液中,必須使用前先行配制完成。
6DMSO之等級和無菌過濾之方式為何? 冷凍保存使用之DMSO等級,必須為Tissue culture grand之DMSO,基本身即為無菌狀況,第一次開瓶后應(yīng)立即少量分裝與無菌試管中,保存于4度,避免反復(fù)冷凍解凍造成DMSO之裂解而釋出有害物質(zhì),并可減少污染之機(jī)會。若要過濾DMSO,則需使用耐DMSO之Nylon材質(zhì)濾膜。
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