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本文主要介紹內毒性,及其毒性反應。內毒素是革蘭氏陰性細菌細胞壁中的一種成分,叫做脂多糖。內毒素只有當細菌死亡溶解或用人工方法破壞菌細胞后才釋放出來,所以叫做內毒素。內毒素耐熱而穩(wěn)定,抗原性弱。在100℃的高溫下加熱1小時也不會被破壞,只有在160℃的溫度下加熱2到4個小時,或用強堿、強酸或強氧化劑加溫煮沸30分鐘才能破壞它的生物活性。內毒素不是蛋白質,因此非常耐熱。
關鍵詞:內毒素,毒性反應,內毒素檢測,內毒素去除
內毒素與外毒素的區(qū)別 內毒素與外毒素不同之處在于:內毒素不能被稀甲醛溶液脫去毒性成為類毒素;把內毒素注射到機體內雖可產生一定量的特異免疫產物(稱為抗體),但這種抗體抵消內毒素毒性的作用微弱。
內毒素檢測方法 1、 凝膠法系通過鱟試劑與內毒素產生凝集反應的原理來定性檢測或半定量內毒素的方法。凝膠法鱟試劑常見規(guī)格為0.1ml/支或0.5ml/支或者更大裝量,使用時應加除熱原水(細菌內毒素檢查用水)復溶后使用。凝膠法是通過觀察有無凝膠形成作為反應的終點。此法操作比較簡單,經濟,不需要專用測定設備,可以進行定性或半定量測定。 2、動態(tài)濁度法、終點濁度法、動態(tài)顯色法、終點顯色法,這四種方法都是定量檢測內毒素的。 根據(jù)檢測原理,終點濁度法和動態(tài)濁度法都屬于濁度法。濁度法系利用檢測鱟試劑與內毒素反應過程中的濁度變化而測定內毒素含量的方法。終點濁度法未見商品化產品。動態(tài)濁度法(又稱動態(tài)比濁法)是檢測反應混合物的濁度上升某一預先設定的吸光度所需要的反應時間,或是檢測濁度增加速度的方法。 3、終點顯色法和動態(tài)顯色法都是屬于顯色基質法。顯色基質法系利用鱟試劑與內毒素反應過程中產生的凝固酶使特定底物顯色釋放出的呈色團的多少而測定內毒素含量的方法,根據(jù)產物顏色判斷內毒素濃度,又稱為比色法。
內毒素去除方法 1、超濾膜和荷電微孔濾膜法 由于內毒素具有較大的相對分子質量,因此可選用超濾膜去除水中的內毒素。 超濾膜的孔徑及材質的選擇,需視被處理藥物的相對分子質量、特性、及藥品中熱原的含量而定。如要截留大部分熱原,需采用截留相對分子質量為5000或10000的超濾膜,此時操作過程中的壓力較高,另外對部分含有較大相對分子質量成份的醫(yī)藥制劑也不合適。 因為在除去熱原的同時會阻留或吸附藥液中的有效成份,使產品收率大受影響。 由于內毒素分子在中性條件下本身帶負電荷,因而選擇帶有正電荷的材質如聚砜、聚丙 烯腈、聚酰胺等微孔濾膜可增強對內毒素分子的去除效果,另外,也有人將硅藻土涂漬在纖維素膜上,然后在其上吸附上荷正電聚電解質,用于去除內毒素。但這些荷電微孔濾膜對內毒素的去除效果受pH的影響較大。 2、石棉及活性炭吸附法 活性炭用于去除內毒素是由于內毒素的相對分子質量較大,這種方法適合于組分較為 簡單的小分子的溶液中或水中內毒素的去除。比較適合純水溶液中內毒素的去除。但由于活 性炭的選擇性較差,易吸附有效成份,且純化后溶液中的殘余活性炭不易去除,因此目前已 很少使用。 3、化學降解法 化學降解法是指用強酸、強堿或氧化劑等使內毒素降解以達到去除內毒素的目的,主要用于玻璃、塑料和其它高分子材料器皿上內毒素的去除。這種方法有可能造成目標產物的流失、降解或失活,因此對于具有生物活性物質溶液中的內毒素去除顯然是不利的。 4、相分離法 Liu等發(fā)展了一種采用Triton X-114從大量重組體蛋白制品中去除內毒素的方法。據(jù) 此文報道,利用這種相分離法,對內毒素的去除率達99%以上,對蛋白質的回收率大于90%, 且不影響有效成份的活性。 5、離子交換色譜法 離子交換色譜法是根據(jù)內毒素帶有部分負電荷的性質,用陰離子交換色譜來去除內毒 素,但這種方法不適合于溶液中存在其它帶負電荷物質的情況。如二乙基胺乙基(DEAE) 陰離子交換介質適于從堿性蛋白質中去除內毒素,成本低,吸附容量大。Chibata等人 采用一種以吸附劑吸附溶液中的內毒素的方法去除內毒素。吸附劑由不溶于水的載體(如 Cellulose)和含氮雜環(huán)的化合物(R-A-X)組成,其中R是含氮雜環(huán)基團,A是烷基或鏈烯基,X是H原子或作用基團。含氮雜環(huán)和烷基可由一個或多個取代物選擇性取代,此化合物直接或通過間隔臂連接到載體上。 6、親和色譜法 親和色譜法是利用物質的生物學特性來達到物質的分離,是去除內毒素的一種較為理想 的方法。只要采用適當?shù)呐浠?,將它固載于親和色譜的基質上合成出親和介質,就可使它成 為一種去除內毒素的高效能、高選擇性方法。相對于上述方法來說,親和色譜法具有其顯著 的優(yōu)越性,去除率高、選擇性好。 自80年代起,組胺、組氨酸就開始用作去除內毒素的親和配基。Satoshi Minobe報道,以組氨酸為配基的柱介質在低離子強度(I = 0.02),pH 3 ~ 8的條件下,對內毒素的去除效果最好。商振華等在此基礎上制成了以組氨酸為配基的聚酰胺膜介質,在所選擇的最佳條件下成功地應用于BSA、溶菌酶等生物制劑中內毒素的去除。Legeklallails等則成功地利用組氨酸為配基的中空膜(PEVA)去除了IgG中的內毒素。
以上就是內毒素與外毒素的區(qū)別,內毒素檢測及去除方法的全部介紹內容。
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