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1. 實驗進行前，無菌室及無菌操作臺(laminar flow) 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌，以70 %ethanol 擦拭無菌操作抬面，并開啟無菌操作臺風(fēng)扇運轉(zhuǎn)10 分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面。操作間隔應(yīng)讓無菌操作臺運轉(zhuǎn)10 分鐘以上后，再進行下一個細胞株之操作。 2. 無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時放置，其它實驗用品用完即應(yīng)移出，以利于氣流之流通。實驗用品以 70 % ethanol 擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作應(yīng)在抬面之中央無菌區(qū)域，勿在邊緣之非無菌區(qū)域操作。 3. 小心取用無菌之實驗物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約45° 角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。 4. 工作人員應(yīng)注意自身之安全，須穿戴實驗衣及手套后才進行實驗。對于來自人類或是病毒感染之細胞株應(yīng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃壷疅o菌操作臺(至少 Class II)。操作過程中，應(yīng)避免引起aerosol 之產(chǎn)生，小心毒性藥品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖銳針頭之傷害等。 5. 定期檢測下列項目： 6. 水槽可添加消毒劑(Zephrin 1:750)，定期更換水槽的水 請問工作濃度的胰酶是不是應(yīng)保存在－20度？如果放在4度冰箱可以保存多久呢？是不是幾個小時就會失去活性？ 平時放在-20度，分裝在50毫升螺口管，用時拿一管放4度用。 1. 認真按照操作規(guī)程進行實驗，一般不大會導(dǎo)致污染，很多情況下是由于所用的試劑或培養(yǎng)基有污染而使實驗失敗， 2. 粉末培養(yǎng)基配制好后(加了血清)，一般在4度盡量不要超過1個月，如在-20度存放時間可長一些，但最好也不要超過3-4個月，可能對于永生化細胞株來說要求不是太高，但我在過去的4年里一直是作原代 細胞培養(yǎng) 的，細胞嬌弱，經(jīng)驗表明放置時間不宜過長。 3. 關(guān)于實驗用品的清洗與消毒，我的經(jīng)驗是：用過的玻璃器皿先在清水中浸泡30min以上，然后加少許清洗劑，以超聲波洗滌30min左右，(如無超聲波洗滌器可用軟毛刷輕輕刷洗干凈)，撈出晾干，再在鉻酸洗液中浸泡6-18h(或過夜)后，自來水清洗10-15遍，雙蒸水清洗3-4遍，晾干，高壓消毒后即可使用。 許多塑料制品也可以高壓消毒，例如培養(yǎng)瓶蓋，膠塞，吸頭等。不能用于高壓的一般均已制成一次性作用的商品了，當(dāng)然如果 money有限，如進口的培養(yǎng)板、皿等，也可以重復(fù)使用1-2次，我當(dāng)時使用方法是將其完全清潔后，使用前在紫外燈下敞開照射1-1.5h即可，我做過多次，沒有出現(xiàn)問題。塑料培養(yǎng)瓶由于清洗消毒不便，最好不要重復(fù)使用，如一定要重復(fù)用，可用環(huán)氧乙烷等消毒，(消毒后一定要放置半年以上方可使用) 在光鏡下，上皮細胞通常呈“鋪路石”樣排布，細胞之間有拉絲現(xiàn)象（即距離較遠的細胞可以通過細長的觸手相連），細胞有成片生長的特性。而間質(zhì)細胞通常呈梭形，沒有有成片生長的特性，細胞之間的聯(lián)系不緊密。但是細胞的形態(tài)特征會因為生長條件的改變而改變，如HeLa細胞是上皮細胞，但是在酸性培養(yǎng)條件下會變?yōu)樗笮巍?/p>
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