| ? | ||||||||||||
|
||||||||||||
 |
 |
 |
 |
 |
 |
 |
 |
 |
 |
| 購買進(jìn)口儀器、試劑和耗材——就在始于2001年的畢特博生物 m.kjhfd.cn |
lonza 無血清 培養(yǎng)基 網(wǎng)址鏈接 http://bitebo.com/a/gb2312/gongsixinxi/shichanghuodong/2013/0331/5024.html
細(xì)胞血清培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)基的配制以及區(qū)別 細(xì)胞培養(yǎng)基是如何配制的？ 培養(yǎng)細(xì)胞的完全培養(yǎng)基由基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加劑(如血清或無血清培養(yǎng)用的某些確定的激素及生長因子)組成，培養(yǎng)基的配方一直在改進(jìn)，其中包括抗生 素和抗有絲分裂劑等等。 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 絕大多數(shù)培養(yǎng)基是建立在平衡鹽溶液基礎(chǔ)上， 添加了氨基酸、 維生素和其它與血清中濃度相似的營養(yǎng)物質(zhì)。 最廣泛應(yīng)用的培養(yǎng)基是邁健基礎(chǔ)培養(yǎng)基和邁健培養(yǎng)基營養(yǎng)添加物的混合物，其中含有 13 種必須氨基酸、8 種維生素。而邁健培養(yǎng)基也包括非必須氨基酸，維生素的范圍亦很廣， 另外常規(guī)含有無機(jī)鹽和代謝添加劑(例如核苷酸)。 現(xiàn)應(yīng)用于快速生長的細(xì)胞， 同培養(yǎng)基含有相同的營養(yǎng)成分，但濃度高出 2~4 倍。 選擇某種培養(yǎng)基，應(yīng)仔細(xì)了解成分表， 應(yīng)知道大多數(shù)情形下培養(yǎng)基都有不足。例如，有些培養(yǎng)基在氨基酸中包括有谷氨酸，而這種 培養(yǎng)基雖廣泛用于神經(jīng)生物學(xué)領(lǐng)域， 但它對某些對谷氨酸敏感的可能有細(xì)胞外毒性損傷的神經(jīng)元而言，則并非最佳選擇，特別是如果神經(jīng)元生長在缺乏膠質(zhì)的環(huán)境中時。F12 中含有硫 酸亞鐵，據(jù)報道也有神經(jīng)毒效應(yīng)。 在所有這些培養(yǎng)基中， 谷氨酸比其他氨基酸有更高的濃度， 這是因為它具有不穩(wěn)定性以及在許多細(xì)胞培養(yǎng)中它常用作碳源。 對于神經(jīng)元的培養(yǎng)常常在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中增加葡萄糖的含 量到 0.6%或者加入丙酮酸(若培養(yǎng)基中這兩種物質(zhì)缺乏時)。 但通常在原代培養(yǎng)中使用也能有 比較令人滿意的結(jié)果。 血清細(xì)胞在單純的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中不能存活， 在特殊類型的細(xì)胞培養(yǎng)中必須提供某些痕量營養(yǎng) 物質(zhì)及生長因子才能使細(xì)胞得以生長并維持生長狀態(tài)。 基礎(chǔ)培養(yǎng)基常常要添加血清， 血清終濃度多為 5~20%。 特殊用途的血清來源須用經(jīng)驗確定， 廣泛應(yīng)用的血清種類有馬血清與胎牛血清。胎牛血清中富含有絲分裂因子，常選其作增殖細(xì)胞用的血清，也用于細(xì)胞系和原代培養(yǎng)。而馬血清常常用來作有絲分裂后的神經(jīng)元培養(yǎng)。然而，很多人也將胎牛血清用于神經(jīng)元培養(yǎng)， 也有人用馬血清來培養(yǎng)膠質(zhì)細(xì)胞。 用大鼠進(jìn)行神經(jīng)元培養(yǎng)的某些研究者喜歡使用同型 血清;人類的胎盤血清， 亦曾用于神經(jīng)組織的器官類型的培養(yǎng)， 也用在一些特殊培養(yǎng)種類中。血清培養(yǎng)基存在一定的弊端， 無法規(guī)避動物血清中的異源體， 如果使用動物血清培養(yǎng)基 培育出來的細(xì)胞輸入人體，所以可能存在人體異源體排斥和沖突，有一定風(fēng)險，現(xiàn)如今該研 究領(lǐng)域為了規(guī)避這樣的風(fēng)險， 研究發(fā)明了邁健細(xì)胞無血清培養(yǎng)基， 取代血清培養(yǎng)基的不利因 素。 無血清培養(yǎng)基 1979 年神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)了一個重要進(jìn)展，用化學(xué)添加劑即可維持神經(jīng)細(xì)胞存活與生 長而不需要在培養(yǎng)基中添加血清。 其工作基礎(chǔ)是用合適的激素、 營養(yǎng)物和促貼壁的物質(zhì)的組 合置換培養(yǎng)基中的成分，最后找到了適合大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)的試劑配方，該配方稱為 N2，專門用于神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)，添加了胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、黃體酮、腐胺和硒。胰島素和胰島素樣生 長因子對于大多數(shù)類型細(xì)胞的存活和生長有重要作用， 硒是谷胱甘肽產(chǎn)生的合作因子， 可能 有助于過氧化物和超氧化物的水解，有報道說還能防止細(xì)胞的光照損傷。 未料到的是上述配方構(gòu)成的培養(yǎng)基可以支持神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系快速增殖， 隨后又發(fā)展 了能支持原代培養(yǎng)的各種神經(jīng)元生長的培養(yǎng)基， 這種培養(yǎng)基在許多實(shí)驗室里已取代了有血清 培養(yǎng)。 在某些培養(yǎng)方案中，細(xì)胞直接進(jìn)入無血清培養(yǎng)，這樣的培養(yǎng)基可以消除來自血清的不 均一性。更為重要的是，它們可用來檢測生長因子以及其他促進(jìn)神經(jīng)元存活或生長的因子， 或者用來檢測那些可保護(hù)神經(jīng)元免遭環(huán)境毒物損傷的制劑。 專用于神經(jīng)元的培養(yǎng)基在某些培 養(yǎng)環(huán)境中還可以減低非神經(jīng)元細(xì)胞的增殖，故可使神經(jīng)元純化。 邁健 MSC Basal Medium 間 充質(zhì)干細(xì)胞無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基和邁健 MSC Supplement 間充質(zhì)干細(xì)胞無血清營養(yǎng)添加物共同 使用， 細(xì)胞貼壁及增值效果更好。 同時邁健免疫細(xì)胞無血清培養(yǎng)基廣泛應(yīng)用到生物免疫治療 領(lǐng)域，細(xì)胞增殖效果更明顯，有效規(guī)避醫(yī)療風(fēng)險。 血清中含有的組分，例如血清蛋白，可作為代謝毒物清除劑使用并能聚集于培養(yǎng)基中。 當(dāng)缺乏這些成分時， 如神經(jīng)元在無血清培養(yǎng)基中生長時， 特別容易為過氧化物及自由基傷害， 這已被許多研究者注意到了。 過氧化物酶以及超氧化物歧化酶可阻止培養(yǎng)基中過氧化物和超 氧化物的累積， 有報道講可以促進(jìn)低密度培養(yǎng)細(xì)胞的存活。 有學(xué)者發(fā)現(xiàn)細(xì)胞存活可為氧分壓 的下降而促進(jìn)。因而，無血清培養(yǎng)基的配方常含有抗氧化劑的試劑。例如，維生素 E 和丙酮 酸，可作為過氧化物清除劑使用。上述這些影響在高密度培養(yǎng)時變小，特別是神經(jīng)元與膠質(zhì) 共培養(yǎng)時，它們可以吸收和代謝神經(jīng)元毒性物質(zhì)如谷氨酸。 應(yīng)該注意，盡管無血清培養(yǎng)基是有化學(xué)限定性的，但在培養(yǎng)過程中它仍有變動，培養(yǎng)起 始時可能有些物質(zhì)缺乏，而后細(xì)胞的產(chǎn)物可能積累，從而使培養(yǎng)基的成分改變。這其實(shí)是有 另一方面的好處，即條件培養(yǎng)基(已培養(yǎng)過細(xì)胞的培養(yǎng)基)的形成，條件培養(yǎng)基常常用來增加 神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞的發(fā)育。 生長因子絕大多數(shù)哺乳類胚胎神經(jīng)元有嚴(yán)格的營養(yǎng)要求， 若不能 提供適宜的生長因子或合適的因子組分，將會使絕大多數(shù)神經(jīng)元在體外培養(yǎng)的數(shù)天中死亡。 解決這一問題有兩條思路， 一是讓培養(yǎng)細(xì)胞提供自己的營養(yǎng)因子， 二是在培養(yǎng)基中加入純的 生長因子。如果細(xì)胞混合物能在高密度時生長，所需的生長因子便會積累到可觀的數(shù)值，尤 其當(dāng)培養(yǎng)基很少變化時。 若某種細(xì)胞混合物生長時有很少的營養(yǎng)需求， 可保持培養(yǎng)基在一段 時間里不作任何變動，以使?fàn)I養(yǎng)(生長)因子積累，而最后促使所需要的細(xì)胞類型能夠生長。 但是，這種對營養(yǎng)(生長)因子自身倚賴性亦有弊端，因為通常在混合細(xì)胞群體中細(xì)胞很難有 同比例增殖，某些細(xì)胞會因生長條件的貧乏而受限制。另外，這種方法只能進(jìn)行相當(dāng)高密度 的細(xì)胞培養(yǎng)。 因為培養(yǎng)基的條件在細(xì)胞的較低密度時變的不夠有效。 不過某些時候純化神經(jīng) 元群體的低密度培養(yǎng)可用條件培養(yǎng)基(經(jīng)過了高密度培養(yǎng))進(jìn)行，或在膠質(zhì)上生長的神經(jīng)元所 用過的培養(yǎng)基來支持。
lonza 無血清 培養(yǎng)基 網(wǎng)址鏈接 http://bitebo.com/a/gb2312/gongsixinxi/shichanghuodong/2013/0331/5024.html |
購買進(jìn)口儀器、試劑和耗材——就在始于2001年的畢特博生物
m.kjhfd.cn |
|
