康寧/Corning CellGro® 澳洲來源胎牛血清 (康寧)

康寧/Corning® 淋巴細胞無血清培養(yǎng)基

血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等，這些物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。胎牛血清取自剖腹產(chǎn)的胎牛，含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份，常用于動物細胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。目前實驗室用胎牛血清產(chǎn)品種類繁多，本專題介紹了幾個常用品牌的胎牛血清產(chǎn)品以及其在使用中常見的一些問題，希望能給大家?guī)硪欢◣椭?

                      一、胎牛血清的標準、成分及其功能

簡介：在常規(guī)動物細胞培養(yǎng)實驗中所用到的細胞培養(yǎng)基往往需要加入胎牛血清。蛋白質(zhì)是牛血清的主要成分，它對于細胞的生長起到關鍵的作用。我們常常聽說的還有小牛血清，那么胎牛血清和小牛血清有沒有區(qū)別？它們的不同點又在哪里呢？本文檔明確定義了什么樣的血清才是標準的胎牛血清，也說明了胎牛血清的功能到底有哪些？

胎牛血清

一、胎牛血清

各項質(zhì)量指標符合2005版《中華人民共和國藥典》第三部附錄的要求。

1、性狀、外觀 淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。

2、蛋白質(zhì)含量 3.5%～5.0%( w/v)

3、血紅蛋白含量 ≤ 0.02%( w/v)

4、無菌檢驗　陰性

5、支原體檢驗　陰性

6、細菌內(nèi)毒素 ≤5(EU/ml)

7、牛腹瀉病毒 陰性

8、大腸桿菌噬菌體 陰性

9、支持細胞增殖(Sp2/0-Ag14)　生長曲線(接種濃度)最大增殖濃度≥2.5×106 個/ml

細胞倍增時間 ≤15h

克隆率 ≥85%

二、血清的主要成分

血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等，這些物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。

胎牛血清應取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。

顯然，胎牛血清是品質(zhì)最高的，因為胎牛還未接觸外界，血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分最少。

三、功能

牛血清是細胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份，常用于動物細胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。

1.提供對維持細胞指數(shù)生長的激素，基礎培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。

2. 提供結(jié)合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。

3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。

4.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。

5.起酸堿度緩沖液作用。

6.提供蛋白酶抑制劑，使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活，保護細胞不受傷害。

胎牛血清的標準、成分及其功能

                                 二、小牛血清和胎牛血清的區(qū)別

摘要：

胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。

1、來源不同：

胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。組份與比例不同：兩者所含的促細胞生長因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同，用途與用法不同：某些細胞必需胎牛血清才能生長，而有些細胞只需小牛血清即可，使用濃度不同，一般在5%-10%，有特殊要求的濃度在20%?！　⊙灞４婧褪褂庙氉⒁猓貉鍛４嬖?5℃至-20℃，若存放在4℃不可超過一個月。解凍血清時 ，應先將血清至于2-8℃冰箱，并經(jīng)常搖勻使之溶解，然后至室溫放置使之升溫，絕對不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中，如放在37℃解凍，顏色加深，粘稠度也會增加，血清在解凍和熱滅活后，應按用量分裝并于-20℃保存，避免反復凍融。

2、胎牛血清，小牛血清和新生牛血清三種之間的區(qū)別：

這三種血清的成份，總體沒有什么明顯差別，只是有一些成分與其生存環(huán)境有關，如上述有人說的抗體很等少。此外，因生長發(fā)育的需要，有些成分在小牛出生后會發(fā)生一些變化。不過還沒有搞清楚它與其它的血清之間的差別。有一點可以肯定，胎牛血清中的部分功能蛋白與小牛血清中的含量有差別。

3、最為重要的一點是：

胎牛本身生活在一個潔凈環(huán)境當中，其血清與外界隔絕，只要生產(chǎn)工藝科學規(guī)范，其質(zhì)量肯定要比后兩者好。

4、根據(jù)牛出生時間和血清采制分離方法分為：

（1）胎牛血清：八月齡胎牛心臟穿刺取血;

（2）新生牛血清：出生12-24小時新生牛靜脈采血;又可細分為：a.高級新生牛血清：采血后靜置自然析出的血清;b.標準新生牛血清：c.經(jīng)離心分離的血清;d.普通新生牛血清：融血或微融血的血清;

（3）小牛血清：出生三月齡小牛動脈采血分離血清;

血清是血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等，這些物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。對血清的成分和作用的研究雖有很大進展，但仍存在一些問題。

胎牛血清是品質(zhì)最高的，因為胎牛還未接觸外界，血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分最少。

一般選用血清種類可以根據(jù)ATCC及實驗需要來選擇

其實，除了一些比較嬌貴的細胞，如干細胞之類的，其余的大部分細胞培養(yǎng)，用國產(chǎn)的足以!而且四季青之類的口碑也頗好，性能也比較穩(wěn)定，所以很多實驗室都在用。拋開法好一點的文章來說，這是個明智的選擇。如果想做好文章，那就要和國際接軌了，燒一點錢，影響因子提高點，也值啊!

                              三、胎牛血清產(chǎn)品等級介紹

摘要：

本文將胎牛血清分成五個級別，并詳細介紹各級別的血清產(chǎn)品和特點。

第一類，最高級別，是專門用于干細胞的特級胎牛血清

1、Hyclone的特級胎牛血清

目前，性能最好的血清，還是要說說Hyclone的特級胎牛血清，貨號是SH30070.03，它是Hyclone的“招牌菜”。

Hyclone特級胎牛血清(Defined FBS)，貨號SH30070，是世界上唯一經(jīng)過40納米過濾的頂級胎牛血清，極佳的促細胞生長作用及產(chǎn)品穩(wěn)定性。內(nèi)毒素含量≤10EU/ml，血紅蛋白含量≤10mg/dl。

此血清可以廣泛用于各種細胞培養(yǎng)，包含任何干細胞系的培養(yǎng)。

因為美國那邊有瘋牛病，無法進口。實際上，40nm的過濾，已經(jīng)將全部的病毒、支原體處理掉，同時，是用于科研級別的，潔凈程度非常高。不讓進口，只是我們國家為了保護本國畜牧業(yè)的一個手段，針對牛肉方面，而胎牛血清是受到殃及而已。

2、Gibco的特級胎牛血清

稍次一點的是Gibco公司在美國原裝生產(chǎn)的特級胎牛血清，這款血清，貨號是16000-044，是100nm過濾3次，內(nèi)毒素和血紅蛋白含量都可以與Hyclone的SH30070.03相媲美。也可以用于培養(yǎng)大部分的干細胞系。同樣是美國來源，所以渠道特殊。

3.TCB的特級胎牛血清

TCB(Tissue Culture BioLogicals)公司作為一家生物行業(yè)類的著名供應商，成立于1978年，大部分血清的采集和加工都在加利福尼亞。每一批的原材料都經(jīng)過嚴格篩選，所有的產(chǎn)品都在FDA認證的cGMP車間進行!

TCB 公司一貫重視產(chǎn)品質(zhì)量，為客戶提供最優(yōu)質(zhì)的血清及相關產(chǎn)品，經(jīng)過多年的發(fā)展，公司產(chǎn)品種類豐富，各種品質(zhì)的血清和培養(yǎng)基能滿足所有實驗室的需求。

TCB 公司經(jīng)過美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)和美國農(nóng)業(yè)部(USDA)的授權認證。與人相關的產(chǎn)品符合疾控中心(CDC)的相關法規(guī)。

TCB是美國農(nóng)業(yè)部(USDA)動植物檢疫局(APHIS)獸醫(yī)處(VS)下屬的國家動物進出口中心(NCIE)的檢疫認可單位，允許可控原材料、組織、細胞等的進出口貿(mào)易!

4. Bioind特優(yōu)級胎牛血清

血源來自北美和澳大利亞BioInd公司的生產(chǎn)完全符合GMP的要求，并通過ISO9000:2001和ISO 13485:2003質(zhì)量認證。

以安全，穩(wěn)定，高效為原則的BioInd公司，所有的產(chǎn)品質(zhì)量均完全符合國際標準。Biological Industries主營細胞培養(yǎng)類產(chǎn)品，BioInd工廠加工的胎牛血清均符合USDA標準及歐洲標準血清。根據(jù)美國農(nóng)業(yè)部標準，原始血清均采自未發(fā)生瘋牛病(BSE)和口蹄疫(FMD)疫情的國家。Biological Industries三步濾菌處理法，最后的過濾步驟為連續(xù)通過三個100納米的濾膜。血清生產(chǎn)的潔凈級別為100級。所有分裝工作臺都通過高效微?？諝膺^濾器過濾，并保持正壓分裝環(huán)境要對總微粒、懸浮微粒數(shù)和壓力進行監(jiān)控。分裝之后，終產(chǎn)品迅速-20度凍存，并隔離，直到所有的質(zhì)量控制檢測完成.

第二類，優(yōu)等胎牛血清

給您推薦幾款，如下：

1、Hyclone的加拿大優(yōu)等胎牛血清

性價比最高的是Hyclone加拿大優(yōu)等胎牛血清(CharacterizendFBS)SH30396.03 血清采自加拿大，由hyclone公司總部的員工采集加工，采集方法，加工過程，檢定標準與美國原產(chǎn)優(yōu)等胎牛血清完全一致，市場價格低于美國原產(chǎn)的。經(jīng)過3次100nm過濾，內(nèi)毒素含量≤25EU/ml，血紅蛋白含量≤25mg/dl

2、Hyclone的南美優(yōu)級胎牛血清

大體與加拿大的優(yōu)等血清是一樣的，級別也非常相似，貨號是sv30087.02，該胎牛血清來源于南美洲，以封閉的心臟穿刺方式采集，產(chǎn)品經(jīng)3次100nm 過濾，經(jīng)嚴格檢測確保無支原體，細菌病毒檢測依據(jù)美國藥典(USP)和美國聯(lián)邦法規(guī)第九篇(9CFR)，內(nèi)毒素含量≤10 EU/ml，血紅蛋白含量≤20 mg/dl，完全符合美國 HyClone® 優(yōu)等胎牛血清的檢測標準。

3、Gibco的澳大利亞胎牛血清

情況和Hyclone的澳大利亞胎牛血清差不多，市場價也是3200元/500ml左右。

這一級別的血清，也能用于干細胞培養(yǎng)，可是，不象特級胎牛血清那么優(yōu)秀。

因為，此胎牛血清屬于澳大利亞生產(chǎn)的，不在疫區(qū)，可以正常報關進口，目前沒有受到任何影響，所以，就目前而言，算是最好的胎牛血清了，有不少客戶都此血清來培養(yǎng)干細胞，效果還是比較不錯。

4、TCB的優(yōu)級胎牛血清

情況和Hyclone的澳大利亞胎牛血清差不多，市場價也是2300元/500ml左右。

這一級別的血清，也能用于干細胞培養(yǎng)，可是，不象特級胎牛血清那么優(yōu)秀。

第三類，一般級別的進口胎牛血清

1、Hyclone的南美胎牛血清

目前，市場上用的最多的Hyclone血清是南美胎牛血清(FBS)SV30087 ，此血清采自南美，在國內(nèi)(蘭州)過濾并測試檢驗，經(jīng)三次100納米過濾，根據(jù)中國商標法的規(guī)定標貼中文標簽，內(nèi)毒素含量≤10EU/ml,血紅蛋白含量≤20mg/d。

此血清廣泛用于各種腫瘤細胞的培養(yǎng)，還沒有資料記載能夠用于干細胞，也聽說有少數(shù)人用于干細胞培養(yǎng)的，不過，因為本身血紅素比較高，所以，最好不要用于干細胞，

2、Gibco的南美胎牛血清

這款血清，是Gibco針對Hyclone南美胎牛血清做的，價格比較貴，好像是1780元/500m。

3、Gemini的胎牛血清

4、TCB的胎牛血清

5、PAA的胎牛血清

6、JRH澳洲胎牛血清

第四類，國產(chǎn)的各種系列胎牛血清

國產(chǎn)的胎牛血清，國內(nèi)沒有嚴格意義的胎牛血清，胎牛血清本身是需要穿刺取血的，而國內(nèi)都是剖腹產(chǎn)出胎牛，8小時左右取血，然后，進行過濾分裝。

所以，國產(chǎn)的胎牛血清不是嚴格意義的胎牛血清。

價格便宜但是遇到的問題非常多。

第五類，其他血清

依科賽，思洳，超級新生牛血清，可以用于簡單的細胞培養(yǎng)。

                              四、胎牛血清使用中的常見問題

摘要：

文章介紹了儲存和解凍血清方法;血清中包含絮狀沉淀怎么處理;實驗室如何選擇適合的血清等選擇和使用血清時的常見問題及注意事項。

1、 如何儲存和解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?

將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。

長時間儲存在2-8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲存血清，并避免反復凍融。

我們建議血清應保存在-2O℃。若存放于4℃時，請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。

2、血清中包含絮狀沉淀，它們是什么，怎么處理?

沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性，不會影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀，離心血清(400g，1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀，因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以，使用產(chǎn)品時要搖動并加熱血清至37℃，沉淀會自然消失。

3、實驗室如何選擇適合的血清?

國內(nèi)一致認為HYCLONE的血清是最好的，但是根據(jù)我在北美的經(jīng)歷，國外一般認為GIBCO比HYCLONE好，所以并不是價格決定質(zhì)量，但是總的來說這兩種價格普遍偏貴，一般不是太嬌氣的細胞，國產(chǎn)的就夠用了。此外，由于國內(nèi)HYCLONE，GIBCO并沒有生產(chǎn)線，我們只能從代理商那里買，而代理商又魚龍混雜，所以買到假貨的可能性也很大。所以，我一般會從直銷員那里買血清，有的國外生物公司由于剛剛進入中國，知名度不高，但是其實在國外已經(jīng)做得很不錯了，如Wisent等，他們在國內(nèi)有辦事處，我會從那里拿，血清的品質(zhì)和HYCLONE不相上下，但價格相對優(yōu)惠很多。

4、 如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?

按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生：

(1)解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。

(2) 血清分裝凍存時，須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一。

(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。

(4) 勿將血清置于37℃太久，否則血清會變得渾濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破壞，從而影響血清的品質(zhì)。

(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。

(6) 若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。

5、 培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎?

一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時，您應該在兩到三周內(nèi)使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。

6、 為什么要熱滅活血清?

加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究，培養(yǎng)ES細胞、平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。

7、 有必要做熱滅活嗎?

實驗顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或完全沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。

若非必須，可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時間，更確保血清的質(zhì)量!

8、細胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點是污染嗎?如何處理?

一旦您在細胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點生成，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細胞生長的狀態(tài)，黑點是否游動。如果細胞被污染，微生物則會大量繁殖，培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。

如果在鏡下觀察細胞，生長狀態(tài)良好，與黑點出現(xiàn)前相比，沒有任何變化，那么，黑點的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關：

(1)細胞生長過老，破碎的細胞殘骸;

(2)血清質(zhì)量不好，反復凍融的結(jié)果;

(3)配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細胞生長;

(4)配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格?？蓱秒x心、過濾的方法去除這些黑點;

(5)培養(yǎng)原代細胞中出現(xiàn)小黑點，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除。

9、 細胞培養(yǎng)中如何防止黑點生成?

(1) 盡可能地減少血清凍融次數(shù)。

(2) 培養(yǎng)基無需37℃水浴。

(3) 培養(yǎng)基保持最佳PH值7.0- 7.2。

(4) 嚴格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì)，容器定期刷洗。

(5) 掌握細胞傳代的最佳時機，細胞切勿生長過老。

10、小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項?

來源不同：胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。

組份與比例不同：兩者所含的促細胞生長因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同，用途與用法不同：某些細胞必需胎牛血清才能生長，而有些細胞只需小牛血清即可，使用濃度不同，一般在5%-10%，有特殊要求的濃度在20%。

血清保存和使用須注意：血清應保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超過一個月。解凍血清時 ，應先將血清至于2-8℃冰箱，并經(jīng)常搖勻使之溶解，然后至室溫放置使之升溫，絕對不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中，如放在37℃解凍，顏色加深，粘稠度也會增加，血清在解凍和熱滅活后，應按用量分裝并于-20℃保存，避免反復凍融。

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