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lonza 特殊 無(wú)血清 培養(yǎng)基

http://bitebo.com/a/gb2312/gongsixinxi/shichanghuodong/2013/0331/5024.html

作者：梅 玲

　　【關(guān)鍵詞】 ELISA

　　　　HIV抗體檢測(cè)是用于艾滋病防治的一項(xiàng)重要保證措施。因此,提高實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的準(zhǔn)確性,減少假陽(yáng)性和假陰性反應(yīng)的發(fā)生,對(duì)監(jiān)測(cè)、診斷、血液篩查艾滋病來(lái)說(shuō)是很重要的。為了更準(zhǔn)確、更嚴(yán)謹(jǐn)?shù)爻鍪緳z測(cè)報(bào)告，本HIV初篩實(shí)驗(yàn)室在參加省級(jí)機(jī)構(gòu)室間質(zhì)評(píng)的同時(shí)，還進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制?，F(xiàn)將本室進(jìn)行HIV室內(nèi)質(zhì)量控制的程序介紹如下。

　　　　1 試劑來(lái)源

　　　　1.1 外部對(duì)照質(zhì)控血清

　　　　嚴(yán)格按照《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》2004年版【1】制備弱陽(yáng)性對(duì)照血清、保存。

　　1.2 HIV診斷試劑盒

　　　　由省級(jí)HIV實(shí)驗(yàn)室指定使用經(jīng)臨床質(zhì)量評(píng)估敏感性和特異性高的試劑。由上海實(shí)業(yè)科華生物技術(shù)有限公司提供，所用試劑盒及內(nèi)部對(duì)照質(zhì)控血清均在有效期內(nèi)使用。

　　　　2 實(shí)驗(yàn)室設(shè)備校準(zhǔn)

　　　　2.1 anthos fluido24-600型自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)

　　　　本室根據(jù)計(jì)量認(rèn)證質(zhì)量手冊(cè)的要求，嚴(yán)格按照作業(yè)指導(dǎo)書(shū)操作規(guī)程進(jìn)行自校準(zhǔn)，并詳細(xì)填寫(xiě)原始記錄，有自校準(zhǔn)報(bào)告。

　　　　2.2 恒溫水浴箱

　　　　調(diào)節(jié)并控制溫度在37℃±2℃之間。

　　　　2.3 微量加樣器（Finnpipette）、酶標(biāo)儀（Reader2010）

　　　　均經(jīng)省技術(shù)監(jiān)督檢測(cè)中心檢定合格，并在檢定周期一年內(nèi)使用，本室嚴(yán)格按照質(zhì)量手冊(cè)中作業(yè)指導(dǎo)書(shū)的操作規(guī)程對(duì)微量加樣器定期進(jìn)行期間核查，對(duì)酶標(biāo)儀檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行不確定度分析，從而確保其具有良好的重復(fù)性和線性范圍。

　　　　3 操作

　　　　(1)嚴(yán)格按照計(jì)量認(rèn)證質(zhì)量手冊(cè)中作業(yè)指導(dǎo)書(shū)的操作規(guī)程進(jìn)行操作。加入樣品量要準(zhǔn)確，不得混入血細(xì)胞，同時(shí)每板設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照各2孔，空白對(duì)照1孔，質(zhì)控弱陽(yáng)性對(duì)照血清1孔；震搖15s，37±2℃孵育60±5min（嚴(yán)格掌握溫育時(shí)間，以免影響結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確性）；置自動(dòng)洗板機(jī)上洗滌，洗板時(shí)應(yīng)保證洗板機(jī)管路暢通，加液量均勻；不得隨意加減洗板次數(shù)（洗板次數(shù)少出現(xiàn)假陽(yáng)性，洗板次數(shù)多又會(huì)使臨界弱陽(yáng)性變成陰性而漏檢）；拍板（以墊紙不濕為宜）；在2h內(nèi)置于酶標(biāo)儀讀數(shù)，雙波長(zhǎng)450/630nm測(cè)OD值。試劑固定同一廠家，購(gòu)入試劑同時(shí)索要廠家的中國(guó)藥品生物制品檢定所批檢合格復(fù)印件，以保證所用試劑質(zhì)量，不同批號(hào)試劑不得混用。嚴(yán)格按照本中心計(jì)量認(rèn)證手冊(cè)規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行操作。

　　(2)在常規(guī)條件下，對(duì)同一批外部對(duì)照質(zhì)控血清連續(xù)測(cè)定20次，獲得一組S/CO值，求均數(shù)()和標(biāo)準(zhǔn)差(s), 超出2s或3s的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除。將均值()和標(biāo)準(zhǔn)差(s)分別在質(zhì)控框架圖中標(biāo)示出來(lái)。以S/CO值作縱坐標(biāo)(Y軸)，每一次試驗(yàn)作橫坐標(biāo)(x軸)，繪制質(zhì)控圖。從第21次起，將每次質(zhì)控血清的檢測(cè)結(jié)果依次點(diǎn)入該質(zhì)控框架圖中，檢驗(yàn)進(jìn)入質(zhì)控狀態(tài)。每一次實(shí)驗(yàn)必須使用外部對(duì)照質(zhì)控血清，以便監(jiān)控實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和穩(wěn)定性。同時(shí)可以了解各批試劑盒的批間或孔間差異，繪制質(zhì)量控制圖。質(zhì)控圖是把檢測(cè)數(shù)據(jù)與已確定的 “控制限”進(jìn)行比較的圖，圖中為靶值線、±2S線為警告線，±3S為失控線。并按時(shí)間順序點(diǎn)入本實(shí)驗(yàn)室每次實(shí)驗(yàn)質(zhì)控血清的測(cè)定值，觀察其是否在允許范圍內(nèi)，月底計(jì)算當(dāng)月全部質(zhì)量控制血清檢測(cè)結(jié)果的S和CV，并進(jìn)行圖形分析和小結(jié)，然后將質(zhì)控圖存檔保存。

　　　　4 討論

　　　　(1)室內(nèi)質(zhì)控是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部對(duì)所有影響檢測(cè)質(zhì)量的各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行系統(tǒng)控制，目的是控制本實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作的精密度，提高常規(guī)工作前后的一致性。在ELISA法檢測(cè)HIV試驗(yàn)中，當(dāng)質(zhì)控血清的S/CO值波動(dòng)在 +2S范圍內(nèi)，表明工作正常，結(jié)果可靠，若超過(guò) +2S范圍時(shí)，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，及時(shí)分析原始數(shù)據(jù)，對(duì)具體檢驗(yàn)過(guò)程進(jìn)行回顧性分析，查找原因后給予糾正并重復(fù)測(cè)試，若超過(guò) +3S范圍時(shí)，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差、隨機(jī)誤差或外部對(duì)照滴度下降造成。

　　　　(2)引起室內(nèi)質(zhì)控失控的原因很多。如：換用新批號(hào)診斷試劑盒或標(biāo)準(zhǔn)血清、儀器設(shè)備未經(jīng)檢定、校準(zhǔn)或測(cè)試、溫育時(shí)間和溫度不準(zhǔn)確、新的檢驗(yàn)人員、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)血清反復(fù)凍融等，此時(shí)要及時(shí)查找原因予以糾正。

　　　　(3)月底計(jì)算當(dāng)月測(cè)定結(jié)果的S和CV，并與其他月份同一批號(hào)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)血清所得S和CV相比較，通過(guò)圖形資料對(duì)比進(jìn)行誤差分析，從而發(fā)現(xiàn)常規(guī)檢測(cè)的精密性和準(zhǔn)確性是否發(fā)生了變化。

　　　　(4)所用的質(zhì)控弱陽(yáng)性對(duì)照血清為低溫冷凍保存的液體，使用時(shí)要融化徹底并充分混勻，達(dá)到室溫方可使用。室內(nèi)質(zhì)量控制是通過(guò)對(duì)質(zhì)控弱陽(yáng)性對(duì)照血清的檢測(cè)和分析，推斷和控制常規(guī)標(biāo)本的檢測(cè)質(zhì)量，因此，質(zhì)控弱陽(yáng)性對(duì)照血清與檢測(cè)標(biāo)本必須同等對(duì)待。每天檢測(cè)結(jié)束后，檢測(cè)者應(yīng)把當(dāng)天質(zhì)控弱陽(yáng)性對(duì)照血清測(cè)定結(jié)果畫(huà)在圖上，確定在允許范圍內(nèi)，方可發(fā)出標(biāo)本檢測(cè)報(bào)告，這樣做可使檢測(cè)者及時(shí)分析質(zhì)量控制圖中出現(xiàn)的各種問(wèn)題，采取相應(yīng)措施。

　　　　(5)通常把臨界值上下10％的范圍定為檢測(cè)結(jié)果灰區(qū)。對(duì)于檢測(cè)過(guò)程中出現(xiàn)的灰區(qū)標(biāo)本均應(yīng)進(jìn)行重復(fù)測(cè)試，以減少假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果的出現(xiàn)，并對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果和過(guò)程進(jìn)行記錄并存檔保存。

　　　　(6)要做好實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量保證，單純靠室內(nèi)質(zhì)控是不行的，還要建立健全實(shí)驗(yàn)室的各項(xiàng)規(guī)章制度，掌握質(zhì)量控制知識(shí)，做好預(yù)防性質(zhì)量控制，保證標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量等全過(guò)程的質(zhì)量控制，從而提高檢驗(yàn)質(zhì)量。

　　【參考文獻(xiàn)】

　　　　1 全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范.中國(guó)疾病預(yù)防控制中心，2004，12.

　　　　作者單位： 563000 貴州遵義，遵義市紅花崗區(qū)疾病預(yù)防控制中心

　　　　【中圖分類(lèi)號(hào)】 R181.9

　　　　HIV抗體檢測(cè)是用于艾滋病防治的一項(xiàng)重要保證措施。因此,提高實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的準(zhǔn)確性,減少假陽(yáng)性和假陰性反應(yīng)的發(fā)生,對(duì)監(jiān)測(cè)、診斷、血液篩查艾滋病來(lái)說(shuō)是很重要的。為了更準(zhǔn)確、更嚴(yán)謹(jǐn)?shù)爻鍪緳z測(cè)報(bào)告，本HIV初篩實(shí)驗(yàn)室在參加省級(jí)機(jī)構(gòu)室間質(zhì)評(píng)的同時(shí)，還進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制。現(xiàn)將本室進(jìn)行HIV室內(nèi)質(zhì)量控制的程序介紹如下。

　　　　1 試劑來(lái)源

　　　　1.1 外部對(duì)照質(zhì)控血清

　　　　嚴(yán)格按照《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》2004年版【1】制備弱陽(yáng)性對(duì)照血清、保存。

　　1.2 HIV診斷試劑盒

　　　　由省級(jí)HIV實(shí)驗(yàn)室指定使用經(jīng)臨床質(zhì)量評(píng)估敏感性和特異性高的試劑。由上海實(shí)業(yè)科華生物技術(shù)有限公司提供，所用試劑盒及內(nèi)部對(duì)照質(zhì)控血清均在有效期內(nèi)使用。

　　　　2 實(shí)驗(yàn)室設(shè)備校準(zhǔn)

　　　　2.1 anthos fluido24-600型自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)

　　　　本室根據(jù)計(jì)量認(rèn)證質(zhì)量手冊(cè)的要求，嚴(yán)格按照作業(yè)指導(dǎo)書(shū)操作規(guī)程進(jìn)行自校準(zhǔn)，并詳細(xì)填寫(xiě)原始記錄，有自校準(zhǔn)報(bào)告。

　　　　2.2 恒溫水浴箱

　　　　調(diào)節(jié)并控制溫度在37℃±2℃之間。

　　　　2.3 微量加樣器（Finnpipette）、酶標(biāo)儀（Reader2010）

　　　　均經(jīng)省技術(shù)監(jiān)督檢測(cè)中心檢定合格，并在檢定周期一年內(nèi)使用，本室嚴(yán)格按照質(zhì)量手冊(cè)中作業(yè)指導(dǎo)書(shū)的操作規(guī)程對(duì)微量加樣器定期進(jìn)行期間核查，對(duì)酶標(biāo)儀檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行不確定度分析，從而確保其具有良好的重復(fù)性和線性范圍。

　　　　3 操作

　　　　(1)嚴(yán)格按照計(jì)量認(rèn)證質(zhì)量手冊(cè)中作業(yè)指導(dǎo)書(shū)的操作規(guī)程進(jìn)行操作。加入樣品量要準(zhǔn)確，不得混入血細(xì)胞，同時(shí)每板設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照各2孔，空白對(duì)照1孔，質(zhì)控弱陽(yáng)性對(duì)照血清1孔；震搖15s，37±2℃孵育60±5min（嚴(yán)格掌握溫育時(shí)間，以免影響結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確性）；置自動(dòng)洗板機(jī)上洗滌，洗板時(shí)應(yīng)保證洗板機(jī)管路暢通，加液量均勻；不得隨意加減洗板次數(shù)（洗板次數(shù)少出現(xiàn)假陽(yáng)性，洗板次數(shù)多又會(huì)使臨界弱陽(yáng)性變成陰性而漏檢）；拍板（以墊紙不濕為宜）；在2h內(nèi)置于酶標(biāo)儀讀數(shù)，雙波長(zhǎng)450/630nm測(cè)OD值。試劑固定同一廠家，購(gòu)入試劑同時(shí)索要廠家的中國(guó)藥品生物制品檢定所批檢合格復(fù)印件，以保證所用試劑質(zhì)量，不同批號(hào)試劑不得混用。嚴(yán)格按照本中心計(jì)量認(rèn)證手冊(cè)規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行操作。

　　(2)在常規(guī)條件下，對(duì)同一批外部對(duì)照質(zhì)控血清連續(xù)測(cè)定20次，獲得一組S/CO值，求均數(shù)()和標(biāo)準(zhǔn)差(s), 超出2s或3s的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除。將均值()和標(biāo)準(zhǔn)差(s)分別在質(zhì)控框架圖中標(biāo)示出來(lái)。以S/CO值作縱坐標(biāo)(Y軸)，每一次試驗(yàn)作橫坐標(biāo)(x軸)，繪制質(zhì)控圖。從第21次起，將每次質(zhì)控血清的檢測(cè)結(jié)果依次點(diǎn)入該質(zhì)控框架圖中，檢驗(yàn)進(jìn)入質(zhì)控狀態(tài)。每一次實(shí)驗(yàn)必須使用外部對(duì)照質(zhì)控血清，以便監(jiān)控實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和穩(wěn)定性。同時(shí)可以了解各批試劑盒的批間或孔間差異，繪制質(zhì)量控制圖。質(zhì)控圖是把檢測(cè)數(shù)據(jù)與已確定的 “控制限”進(jìn)行比較的圖，圖中為靶值線、±2S線為警告線，±3S為失控線。并按時(shí)間順序點(diǎn)入本實(shí)驗(yàn)室每次實(shí)驗(yàn)質(zhì)控血清的測(cè)定值，觀察其是否在允許范圍內(nèi)，月底計(jì)算當(dāng)月全部質(zhì)量控制血清檢測(cè)結(jié)果的S和CV，并進(jìn)行圖形分析和小結(jié)，然后將質(zhì)控圖存檔保存。

　　　　4 討論

　　　　(1)室內(nèi)質(zhì)控是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部對(duì)所有影響檢測(cè)質(zhì)量的各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行系統(tǒng)控制，目的是控制本實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作的精密度，提高常規(guī)工作前后的一致性。在ELISA法檢測(cè)HIV試驗(yàn)中，當(dāng)質(zhì)控血清的S/CO值波動(dòng)在 +2S范圍內(nèi)，表明工作正常，結(jié)果可靠，若超過(guò) +2S范圍時(shí)，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，及時(shí)分析原始數(shù)據(jù)，對(duì)具體檢驗(yàn)過(guò)程進(jìn)行回顧性分析，查找原因后給予糾正并重復(fù)測(cè)試，若超過(guò) +3S范圍時(shí)，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差、隨機(jī)誤差或外部對(duì)照滴度下降造成。

　　　　(2)引起室內(nèi)質(zhì)控失控的原因很多。如：換用新批號(hào)診斷試劑盒或標(biāo)準(zhǔn)血清、儀器設(shè)備未經(jīng)檢定、校準(zhǔn)或測(cè)試、溫育時(shí)間和溫度不準(zhǔn)確、新的檢驗(yàn)人員、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)血清反復(fù)凍融等，此時(shí)要及時(shí)查找原因予以糾正。

　　　　(3)月底計(jì)算當(dāng)月測(cè)定結(jié)果的S和CV，并與其他月份同一批號(hào)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)血清所得S和CV相比較，通過(guò)圖形資料對(duì)比進(jìn)行誤差分析，從而發(fā)現(xiàn)常規(guī)檢測(cè)的精密性和準(zhǔn)確性是否發(fā)生了變化。

　　　　(4)所用的質(zhì)控弱陽(yáng)性對(duì)照血清為低溫冷凍保存的液體，使用時(shí)要融化徹底并充分混勻，達(dá)到室溫方可使用。室內(nèi)質(zhì)量控制是通過(guò)對(duì)質(zhì)控弱陽(yáng)性對(duì)照血清的檢測(cè)和分析，推斷和控制常規(guī)標(biāo)本的檢測(cè)質(zhì)量，因此，質(zhì)控弱陽(yáng)性對(duì)照血清與檢測(cè)標(biāo)本必須同等對(duì)待。每天檢測(cè)結(jié)束后，檢測(cè)者應(yīng)把當(dāng)天質(zhì)控弱陽(yáng)性對(duì)照血清測(cè)定結(jié)果畫(huà)在圖上，確定在允許范圍內(nèi)，方可發(fā)出標(biāo)本檢測(cè)報(bào)告，這樣做可使檢測(cè)者及時(shí)分析質(zhì)量控制圖中出現(xiàn)的各種問(wèn)題，采取相應(yīng)措施。

　　　　(5)通常把臨界值上下10％的范圍定為檢測(cè)結(jié)果灰區(qū)。對(duì)于檢測(cè)過(guò)程中出現(xiàn)的灰區(qū)標(biāo)本均應(yīng)進(jìn)行重復(fù)測(cè)試，以減少假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果的出現(xiàn)，并對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果和過(guò)程進(jìn)行記錄并存檔保存。

　　　　(6)要做好實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量保證，單純靠室內(nèi)質(zhì)控是不行的，還要建立健全實(shí)驗(yàn)室的各項(xiàng)規(guī)章制度，掌握質(zhì)量控制知識(shí)，做好預(yù)防性質(zhì)量控制，保證標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量等全過(guò)程的質(zhì)量控制，從而提高檢驗(yàn)質(zhì)量。

　　【參考文獻(xiàn)】

　　　　1 全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范.中國(guó)疾病預(yù)防控制中心，2004，12.

　　　　作者單位： 563000 貴州遵義，遵義市紅花崗區(qū)疾病預(yù)防控制中心