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【摘要】 目的 探討C12蛋白芯片檢測在淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌診斷中的意義。 方法 對(duì)已知細(xì)胞學(xué)診斷的淺表淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液進(jìn)行C12檢測，并同時(shí)對(duì)入選標(biāo)本患者進(jìn)行血C12檢測，以病理診斷為最終標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)以上兩種結(jié)果進(jìn)行對(duì)照分析。結(jié)果 在35例淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌中，細(xì)胞學(xué)的正確診斷率為57.1%(20/35),淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液C12檢測陽性率為74.3%(26/35),兩者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.05)；腫瘤組腫瘤標(biāo)記物（TM）指標(biāo)CA199、CEA、Beta-HCG、f-PSA、PSA、CA125、HGH、CA153在血和淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液中含量的比值具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液C12檢測對(duì)淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞學(xué)檢查有一定的輔助診斷價(jià)值，但對(duì)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌的組織學(xué)分類靈敏度不高。

【主題詞】  淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織; 細(xì)胞學(xué)檢查; 腫瘤標(biāo)志物; 診斷; 蛋白芯片

 

多腫瘤標(biāo)志物檢測系統(tǒng)是一種集微電子、微機(jī)械、化學(xué)物理、計(jì)算機(jī)技術(shù)為一體的分析系統(tǒng)，該系統(tǒng)是把多種純化的探針蛋白高密度排列在固定支持物表面上，樣品中的靶蛋白特異性地與探針結(jié)合，所以可以對(duì)待測蛋白進(jìn)行定量、定性和功能分析。我國開發(fā)的C12蛋白芯片檢測系統(tǒng)，是通過分析血清中12種常用腫瘤標(biāo)志物 (CA199，NSE，CEA，CA242，F(xiàn)ettitin，Beta-HCG，AFP，PSA,，f-PSA，CA125，HGH，CA153)的含量，聯(lián)合檢測以期實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤的診斷和檢測^[1]。本實(shí)驗(yàn)旨在通過對(duì)已知細(xì)胞學(xué)診斷的淋巴結(jié)組織的進(jìn)行C12檢測，并與血C12檢測結(jié)果進(jìn)行比較，以病理診斷為最終標(biāo)準(zhǔn)，探討對(duì)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值。

1.1 標(biāo)本來源  取自2007年11月～2009年5月我院腫瘤內(nèi)科門診和住院惡性腫瘤患者35例，其中腺癌20例，鱗癌15例，男20例，女15例，年齡29～81(54.9±12.3)歲；取同期淋巴結(jié)良性病變15例作對(duì)照組，男9例，女6例，年齡21～64(43.4±14.7)歲；兩組之間性別、年齡具有可比性(P<0.05)。穿刺標(biāo)本常規(guī)作細(xì)胞涂片（將吸取物于載玻片上涂勻，95%乙醇固定10 min， HE染色，顯微鏡觀察有無腫瘤細(xì)胞及淋巴細(xì)胞浸潤），將穿刺針管內(nèi)殘留的吸取物約0.5～1 ml注入裝有2 ml生理鹽水的10 ml試管中并渦旋混勻，制成組織細(xì)胞懸液，置于-20℃保存，標(biāo)本不夠時(shí)再行穿刺。

1.2 主要試劑及方法  取受試者清晨空腹靜脈血3 ml，靜置后分離血清，與淋巴結(jié)組織懸液共同采用HD-2001A生物芯片檢測儀及檢測系統(tǒng)進(jìn)行測定(湖州數(shù)康生物科技有限公司)，嚴(yán)格按使用說明書操作檢測。

1.3  細(xì)胞學(xué)診斷 采用HE染色對(duì)細(xì)針穿刺圖片進(jìn)行檢測。

1.4  統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行有關(guān)率的χ2檢驗(yàn)。

2.1腫瘤組和良性病變組C12在淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液及血中陽性率比較 

在35例淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌和15例良性病變患者中，淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液C12檢測的兩樣本陽性率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.05)，提示淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液C12檢測在淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌中陽性率大于良性病變組；血C12檢測的兩樣本陽性率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.05)，提示血C12檢測在淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌中陽性率大于良性病變組。見表1、2。

2.2 腫瘤組和良性病變組C12在血及淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液中測定結(jié)果比較 

腫瘤組CA199、CEA、Beta-HCG、f-PSA、PSA、CA125、HGH、CA153在血和淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液中含量的比值具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.05)；良性病變組Beta-HCG、 f-PSA、HGH在血和淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液中含量的比值具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.05)。見表3。

2.3腫瘤組腺癌和鱗癌中的兩種C12測定結(jié)果比較 

腺癌和鱗癌在血和淋巴結(jié)組織懸液中各項(xiàng)C12指標(biāo)含量比值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P >0.05)，提示 TM陽性與組織學(xué)分類無直接相關(guān)性。見表4。以病理診斷和血C12檢測標(biāo)準(zhǔn)，在35例淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌中，淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞學(xué)的正確診斷率為57.1%(20/35),淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液C12檢測陽性率為74.3%(26/35),兩者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.05)；腫瘤組淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液中的TM指標(biāo)CA199、CEA、Beta-HCG、f-PSA、PSA、CA125、HGH、CA153可以代替該C12蛋白芯片檢測系統(tǒng)在淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值。       

 

 

表1 腫瘤組和良性病變組淋巴結(jié)組織C12檢測結(jié)果

淋巴結(jié)組織C12	腫瘤組	良性病變組
+	26	5
-	9	10

x2=7.474,P=0.006.

表2 腫瘤組和良性病變組血C12檢測結(jié)果

血C12	腫瘤組	良性病變組
+	29	7
-	6	8

x2=6.822,P=0.009.

表3 淋巴結(jié)組織和血C12測定結(jié)果比較分析( ±s)

血中與淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液中C12含量測定結(jié)果比較：*P<0.05,**P <0.01

表4 腺癌和鱗癌的兩種C12測定結(jié)果比較分析( ±s)

血中與淋巴組織結(jié)細(xì)胞懸液中C12含量測定結(jié)果比較：*P<0.05,**P <0.01

蛋白芯片又名蛋白微陣列，就其應(yīng)用而言分為蛋白功能芯片和蛋白檢測芯片兩種類型^[2]。與傳統(tǒng)蛋白質(zhì)研究方法相比，它可以在一次實(shí)驗(yàn)中提供相當(dāng)大的生物信息量，使我們能夠相對(duì)全面、準(zhǔn)確的研究蛋白表達(dá)譜，這是傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)研究方法無法做到的^[3]。蛋白芯片具有高度靈敏性，可以檢測出蛋白樣品中微量蛋白的存在，目前檢測水平已經(jīng)達(dá)到ng/L級(jí)^[4]。因?yàn)榇蠖鄶?shù)單一指標(biāo)的生物學(xué)信息已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足臨床診斷和治療的要求,而且缺乏腫瘤特異性,因某些良性疾病也可出現(xiàn)不同程度的陽性反應(yīng),為彌補(bǔ)單一標(biāo)志物在腫瘤檢測特異性和敏感性上的不足,聯(lián)合檢測多腫瘤標(biāo)志物可得到更有價(jià)值的信息, C12系統(tǒng)則一次性檢測定12個(gè)指標(biāo),提高了在腫瘤檢測方面的敏感性和特異性^[5]。蛋白芯片技術(shù)目前廣泛應(yīng)用于各種癌癥的血清學(xué)檢測和良惡性胸腹水的診斷中，但少見于對(duì)腫瘤組織和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌及鑒別腫瘤類型的分析，以使病理診斷更加精確。劉潔瓊等^[6]應(yīng)用EnvisonTM免疫組化檢測方法對(duì)108例膽囊腺癌、46例癌旁組織和35例慢性膽囊炎手術(shù)切除標(biāo)本石蠟包埋切片的CA199和CA125進(jìn)行分析，結(jié)果顯示膽囊腺癌組織中的CA199和CA125的表達(dá)陽性率(49.1%、51.9%)明顯高于癌旁組織(26.1%、15.2%)和慢性膽囊炎組織(14.3、5.7%)。如果用免疫組化對(duì)腫瘤進(jìn)行嗜鉻粒蛋白(Cg)、神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)等檢測,陽性則支持該腫瘤為神經(jīng)內(nèi)分泌來源的診斷,如肺小細(xì)胞癌與淋巴瘤的鑒別^[7]。學(xué)者^[8]指出:HCG、α-HCG和β-HCG在食管鱗癌中的陽性表達(dá)率分別為56.1%、12.2%和34.1% ,這一結(jié)果與HCG、β-HCG在肺鱗癌以及HCG、β-HCG在大腸病變中的陽性表達(dá)率基本一致。

細(xì)胞學(xué)診斷因其使用方便、創(chuàng)傷小、診斷快速，近年來成為臨床比較常用的診斷淺表淋巴結(jié)疾病的方法，但因取材太少，陽性率不高，臨床應(yīng)用受到一定限制。本研究中將淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌制成組織細(xì)胞懸液，按照血C12檢測標(biāo)準(zhǔn)對(duì)懸液進(jìn)行C12檢測，并對(duì)以上兩種結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果表明：淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌的細(xì)胞學(xué)正確診斷率為57.1%(20/35),淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液C12檢測陽性率為74.3%(26/35),兩者相比差異有顯著性(P <0.05)；淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液和血中C12檢測在淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌中陽性率都大于良性病變組；腫瘤組淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液中的TM指標(biāo)CA199、CEA、Beta-HCG、f-PSA、PSA、CA125、HGH、CA153可以代替該C12蛋白芯片檢測系統(tǒng)在淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值。本研究表明，淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液C12檢測對(duì)淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞學(xué)檢查有一定的輔助診斷價(jià)值，但對(duì)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌的組織學(xué)分類靈敏度不高。

 

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