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          生物知識(shí)

          大鼠骨鈣素(OCN)定量檢測(cè)試劑盒(ELISA)

          作者:admin 來(lái)源:本站 發(fā)布時(shí)間: 2011-01-14 09:36  瀏覽次數(shù):
          購(gòu)買進(jìn)口儀器、試劑和耗材——就在始于2001年的畢特博生物 m.kjhfd.cn

           

          Mouse Antibodies (小鼠抗體)

          http://m.kjhfd.cn/a/gb2312/product/Euroscience/2009/1105/2.html 

          試劑盒產(chǎn)品目錄

          http://m.kjhfd.cn/a/gb2312/product/Wako/shiji/2010/0928/3729.html

           

           

           

           

          本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

           

          大鼠骨鈣素(OCN)定量檢測(cè)試劑盒(ELISA

          使用說(shuō)明書

                                                                

          【大鼠骨鈣素(OCN)Elisa試劑盒試劑盒名稱】

          大鼠骨鈣素(OCN)定量檢測(cè)試劑盒(ELISA)

          【大鼠骨鈣素(OCN)Elisa試劑盒試劑盒用途】

          定量檢測(cè)大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中骨鈣素(OCN)的含量。

          【大鼠骨鈣素(OCN)Elisa試劑盒檢測(cè)原理】

          本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本加入到預(yù)先包被大鼠骨鈣素(OCN)單克隆抗體透明酶標(biāo)包被板中,溫育足夠時(shí)間后,洗滌除去未結(jié)合的成分,再加入酶標(biāo)工作液,溫育足夠時(shí)間后,洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根過(guò)氧化物酶(HRP)催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物,在酸的作用下變成黃色,顏色的深淺與樣品中大鼠骨鈣素(OCN)濃度呈正相關(guān),450nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值,計(jì)算樣本中大鼠骨鈣素(OCN)含量。

          【大鼠骨鈣素(OCN)Elisa試劑盒試劑盒組成】

          1

          酶標(biāo)包被板

          12孔×8條

          7

          顯色劑A液

          6mL

          2

          標(biāo)準(zhǔn)品

          0.3mL×6管

          8

          顯色劑B液

          6mL

          3

          20倍濃縮洗滌液

          25mL

          9

          終止液

          6mL

          4

          樣本稀釋液

          6mL

          10

          說(shuō)明書

          1份

          5

          特殊稀釋液

          6mL

          11

          封板膜

          2張

          6

          酶標(biāo)試劑

          6mL

          12

          密封袋

          1個(gè)

          備注:標(biāo)準(zhǔn)品(1號(hào)→6號(hào))濃度依次為:4、2、1、0.5、0.25、0.125 μg/L.

           

          【大鼠骨鈣素(OCN)Elisa試劑盒需要而未提供的試劑和器材】

          1、37℃恒溫箱

          2、標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

          3、精密移液器及一次性吸頭

          4、蒸餾水

          5、一次性試管

          6、吸水紙

          【大鼠骨鈣素(OCN)Elisa試劑盒操作步驟】

          1、準(zhǔn)備:從冰箱取出試劑盒,室溫復(fù)溫平衡30分鐘。

          2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

          3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本:取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板,固定于框架上,分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔和空白對(duì)照孔,記錄各孔位置,在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL;待測(cè)樣本孔中先加入待測(cè)樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白對(duì)照孔不加。

          4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

          5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書操作洗板)。

          6、加酶標(biāo)工作液:每孔加入酶標(biāo)工作液50μL,空白對(duì)照孔不加。

          7、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

          8、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書操作洗板)。

          9、顯色:每孔先加入顯色劑A 液50μL,再加入顯色劑B液 50μL,平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s),37℃避光顯色15min。

          10、終止:取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μL,終止反應(yīng)(顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

          11、測(cè)定:以空白孔調(diào)零,在終止后15分鐘內(nèi),用450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的吸光值(OD值)。

          12、計(jì)算:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值,計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣本的OD值,在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度,也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。最終濃度為實(shí)際測(cè)定濃度乘以稀釋倍數(shù)。

          【大鼠骨鈣素(OCN)Elisa試劑盒樣本要求】

          1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因?yàn)榀B氮鈉(NaN3)是辣根過(guò)氧化物酶(HRP)的抑制劑。

          2、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能立即試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

          3、樣本應(yīng)充分離心,不得有溶血及顆粒。

          【大鼠骨鈣素(OCN)Elisa試劑盒注意事項(xiàng)】

          1、實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行,實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

          2、酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

          3、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照都做雙份檢測(cè),取平均值,以減小實(shí)驗(yàn)誤差。

          4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,計(jì)算結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。

          5、本試劑盒定量范圍為0.125-4μg/L,超過(guò)此范圍,為標(biāo)準(zhǔn)曲線延伸計(jì)算所得,不做為準(zhǔn)確定量結(jié)果,請(qǐng)用特殊稀釋液稀釋后測(cè)定準(zhǔn)確結(jié)果(0.125-4μg/L范圍內(nèi)),乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本最終濃度。

          6、若顯色過(guò)淺,可適當(dāng)延長(zhǎng)底物溫育時(shí)間。

          7、為避免交叉污染,標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照每加一個(gè)就要更換一次吸頭;酶標(biāo)工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復(fù)使用封板膜。

          8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,不同批號(hào)的試劑不得混用。

          9、底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。

           

          【大鼠骨鈣素(OCN)Elisa試劑盒操作程序總結(jié)】

           

          準(zhǔn)備試劑,樣品和標(biāo)準(zhǔn)品

           

           

          加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,37℃反應(yīng)30分鐘

           

          洗板4次,加入酶標(biāo)試劑,37℃反應(yīng)30分鐘

           

          洗板4次,加入顯色液A、B,37℃顯色15分鐘

           

          加入終止液

           

          15分鐘之內(nèi)讀OD值

           

          計(jì)算

           

          【大鼠骨鈣素(OCN)Elisa試劑盒檢測(cè)范圍】

          0.125μg/L - 4μg/L

          【大鼠骨鈣素(OCN)Elisa試劑盒規(guī)格】

          96人份/盒

          【大鼠骨鈣素(OCN)Elisa試劑盒貯藏】

          2-8℃,避光防潮保存。

          【大鼠骨鈣素(OCN)Elisa試劑盒有效期】

          6個(gè)月

           

           

           

          Mouse Antibodies (小鼠抗體)

          http://m.kjhfd.cn/a/gb2312/product/Euroscience/2009/1105/2.html 

          試劑盒產(chǎn)品目錄

          http://m.kjhfd.cn/a/gb2312/product/Wako/shiji/2010/0928/3729.html

          購(gòu)買進(jìn)口儀器、試劑和耗材——就在始于2001年的畢特博生物 m.kjhfd.cn

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