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血友病A是常見的遺傳性凝血障礙,它是由凝血因子Ⅷ的基因缺陷而致其功能異 常的致其發(fā)病率改為1/1000男性,女性患者極為少見.在臨床上,血友病大都有家族 史,亦有約20~30%的患者為散發(fā)病例,為新生基因突變所致. 一、血友病的遺傳學 本病為X連鎖隱性遺傳病,其基因定痊于Xq28.因子Ⅷ(FVⅢ)基因全長約為186Kb, 包括26個外顯子和25個內含子,其mRNA全長約為9Kb,CDNA占為9009bp.其翻譯產物為 2351個aa殘基的多肽鏈.在FVⅢ基因內含有多個酶切位點,在其翻譯區(qū)尚有VNTR序列 及(CA/n重復序列. 二、FVⅢ基因突變的特點 (一)大范圍的缺失,重排,重復及括入僅點血友病A的5% (二)FVⅢ基因突變的主要類型為單堿置換所引起的點突變,目前還發(fā)現的單堿是 置及在八十種以上,幾乎涉及FVⅢ的所有外顯子和部分內含子. 三、PCR技術在血友病A基因產前診斷中的應用 FVⅢ基因突變以點突變?yōu)橹鳎矣懈叨犬愘|性,因此對患者的診斷10前還是主 要依據臨床表現進行,在一個家系內若要進行血友病A的產前診斷,則必須用連鎖分 析的方法,該方法的應用則必須滿折方法有以下兩種: (一).PCR-RFLP 在因子組基因內及其復側有多組RFLP位點可用為標記進行連鎖分析進行產前診 斷,常用的PCR-RFLP位點有兩種,其引物序列,酶切片段多者情況見下表.
(二),Amp-FLP 在FVⅢ區(qū)內尚有兩個VNTP區(qū),一個位于DXS52,另一個為(CA)n位于DX102內,它 仍均具有復雜的多者性,亦可用于連鎖分析,是引物及擴增產物的多者性見下表
(三)血友病APCR基因診斷程序 1.母親、先證者的RFLP及Amp-FLP,確定風險染色體 2.檢測胎兒性別(SRT) 3.檢測胎兒的RFLP及AmP-FLP 四、散發(fā)病例FVⅢ基因突變的PCR檢測 由于因子FVⅢ的基因突變以點突變?yōu)橹?,而且具有高度特異性,因此,單獨網點 突變的檢測方法仍以診斷,對于形發(fā)病例來說,可用PCR-SSCP,PCR-DGGE及其它的點 突變是篩查方法確定點突變血友病A之間的關系具有重要意義,尤其是PCR-DGGE已用 于血友病A基因點突變的篩查. |
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