? | ||
購買進(jìn)口儀器、試劑和耗材——就在始于2001年的畢特博生物 m.kjhfd.cn |
【摘要】 目的 分析HBeAg和抗-HBe雙陽性的原因。方法 初篩試驗(yàn)用一步法檢測。復(fù)核試驗(yàn)HBeAg仍用一步法和微粒子酶免分析法,抗-HBe用二步法和微粒子酶免分析法。結(jié)果 63份HBeAg和抗-HBe雙陽性標(biāo)本經(jīng)復(fù)核:18份HBeAg陰性,45份抗-HBe陰性。結(jié)論 “e”系統(tǒng)雙陽多為操作誤差和一步法造成,必需進(jìn)行復(fù)核。 關(guān)鍵詞 乙型肝炎病毒 酶免檢測 復(fù)核 乙型肝炎病毒HBeAg陽性,表明病毒復(fù)制活躍、傳染性強(qiáng),與HBsAg同時陽性發(fā)生肝癌的危險系數(shù)增加60倍,抗-HBe陽性說明病毒復(fù)制減少,傳染性弱。近年來,普遍使用ELISA一步法,在工作中遇到HBeAg和抗-HBe雙陽性的少見模式,為了分析這一現(xiàn)象,筆者進(jìn)行了研究,現(xiàn)報告如下。 1 材料與方法 1.1 標(biāo)本來源 本院門診和住院患者1910例,其中63例初篩模式為HBsAg、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc4項(xiàng)陽性。 1.2 試劑和儀器 (1)ELISA試劑盒、HBeAg和抗-HBe為上??迫A生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品,批號分別為:20040316、20040516,酶標(biāo)儀MK-2型、洗板機(jī)均為芬蘭雷索公司產(chǎn)品。HBeAg樣品吸光度值/臨界值(S/N)≥2.1判陽性,抗-HBe以抑制率>50%判陽性。(2)微粒子酶免分析(MEIA),使用美國雅培公司試劑和美國AXSYM全自動酶免發(fā)光分析系統(tǒng)。抗-HBe采用競爭法,以樣本熒光速率值與臨界熒光速率值之比(S/N)≤1.0判陽性。 1.3 方法 (1)初篩:一步法,嚴(yán)格按說明書操作,每加5份血清加入酶標(biāo)抗體。分別檢測HBeAg、抗-HBe.(2)復(fù)核:溶血標(biāo)本重抽血,脂法患者禁脂3天后抽血;血塊收縮不良,分離不完全標(biāo)本,經(jīng)3000r/min10~15min的離心。HBeAg用一步法和微粒子酶免分析。抗-HBe用改進(jìn)二步法和微粒子酶免分析法,改進(jìn)再二步法為先加入50μl血清37℃水浴30min,洗滌3次,加酶標(biāo)抗體37℃水浴30min,再嚴(yán)格按說明書操作。 2 結(jié)果 初篩63份HBeAg和抗-HBe雙陽血清。經(jīng)復(fù)核:18份HBeAg陰性,抗-HBe仍陽性,45份抗-HBe陰性,HBeAg仍陽性。18份HBeAg陰性標(biāo)本為溶血和分離不完全標(biāo)本,初篩與復(fù)檢吸光度(A值)比較明顯下降,差異有非常顯著性(P<0.001),見表1.45份抗-HBe復(fù)核陰性標(biāo)本中,一步法與改進(jìn)2步法吸光度(A值)比較,吸光度值上升,二者差異有非常顯著性(P<0.001),見表2. 表1 HBeAg初篩與復(fù)檢吸光度值比較(略) 表2 3種方法測定血清抗-HBe水平比較(略) 3 討論 有學(xué)者提出HBeAg和抗-HBe雙陽是HBeAg向抗HBe轉(zhuǎn)化的過渡階段 [1] .本次試驗(yàn)與以上理論不完全相符,雙陽性結(jié)果是假陽性所致,可能的原因?yàn)椋喝苎獦?biāo)本釋放大量過氧化物酶活性的血紅蛋白,產(chǎn)生干擾。血塊收縮不良,分離不徹底,血清中混有過氧化物酶成分,對HBeAg產(chǎn)生正干擾 [2] .脂濁致抗-HBe干擾主要考慮乳糜微粒引起,它造成血清黏度增大的運(yùn)動速度減慢或產(chǎn)生屏蔽效應(yīng),抗原抗體結(jié)合幾率下降,最終顯色降低,產(chǎn)生假陽性。一步法對抗-HBe易產(chǎn)生前帶現(xiàn)象,若血清中有大量HBeAg,使固相HBeAb-HBeAg-HBeAb-HRP生成減少,顯色下降產(chǎn)生假陽性。二步法的第一步洗滌洗掉多余HBeAg,可消除有效的假陽性。一步法若加入血清放置時間過長,再加酶標(biāo)抗體也會產(chǎn)生抗-HBe假陽性 [3] .二步法試驗(yàn)有3份抗-HBe仍為陽性,限于條件有限未能研究,可能是抗-HBe和抗-HBc互相干擾所致,或者是AFP、RF、補(bǔ)體、自身抗體、抗大腸桿菌抗體等的干擾[4] . 綜上所述,HBeAg和抗-HBe雙陽多為操作不規(guī)范和一步法影響因素造成。工作中可用一步法復(fù)核HBeAg,改進(jìn)2步法復(fù)核抗-HBe,抗-HBe仍陽性采用美國雅培公司MEIA法復(fù)核可有效消除假陽性的產(chǎn)生。 參考文獻(xiàn) 1 朱忠勇。實(shí)用醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)。北京:人民軍醫(yī)出版社,1992,900-901. 2 趙友云,劉光中,馬煜南。酶免疫檢測HBeAg假陽性原因分析。臨床檢驗(yàn)雜志,2000,18:263. 3 騰龍,陳鋼,洪加林。酶免疫競爭一步法檢測乙型肝炎病毒抗-HBe影響因素探討。中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,2003,26:111. 4 黃云英,劉瑜。建立乙肝免疫五項(xiàng)無效試劑。臨床二級評價方案的探討?,F(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,2002,17:30-32. |
購買進(jìn)口儀器、試劑和耗材——就在始于2001年的畢特博生物
m.kjhfd.cn |
|