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| 購買進(jìn)口儀器、試劑和耗材——就在始于2001年的畢特博生物 m.kjhfd.cn |
品牌現(xiàn)貨促銷 http://m.kjhfd.cn/plus/list.php?tid=79 目前，市縣級醫(yī)院普遍采用固相酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測乙肝5項指標(biāo)，該法操作方便、快捷，特別適合大批標(biāo)本的篩查。但由于ELISA方法學(xué)特點(diǎn)，批內(nèi)、批間的CV值較大。因此，做好該項檢測的質(zhì)量控制是保證結(jié)果真實可靠的基礎(chǔ)現(xiàn)就本室開展此項室內(nèi)質(zhì)控若干措施和體會報告如下。
1．材料與方法
1.1儀器 RT-2100酶標(biāo)儀(深圳雷度生產(chǎn))，附雷度酶標(biāo)信息管理系統(tǒng)外接軟件，ST-36洗板機(jī)購自上?？迫A實驗系統(tǒng)有限公司。
1.2 試劑 (1)乙肝5項試劑購自上海榮盛生物技術(shù)有限公司，批號：HBsAg(20051007)，抗-HBs(20050926)，其余三項皆為20050916。(2)乙肝質(zhì)控血清購自衛(wèi)生部臨床檢驗中心，規(guī)格分別為0.5ng/ml和1ng/ml的HBsAg，30 mIU/ml 抗-HBS，2 Ncu/ml HBeAg,4 cu/ml抗-HBe和2 Ncu/ml抗-HBC。批號200501。
1.3 方法 乙肝5項指標(biāo)操作嚴(yán)格按說明書要求進(jìn)行。質(zhì)控標(biāo)本-20℃保存，臨用前取出放置室溫融化后和患者標(biāo)本同時檢測,剩余質(zhì)控物-4℃冷藏續(xù)用，檢驗結(jié)果用酶標(biāo)儀以主波長450 nm，次波長630 nm 比色，結(jié)果傳至本地計算機(jī)并輸出報告單．質(zhì)控結(jié)果錄入質(zhì)控信息數(shù)據(jù)欄，連續(xù)記錄3次結(jié)果便采用即刻法對第3次數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計、圖形繪出和質(zhì)控提示，即受控、告警、失控。連續(xù)統(tǒng)計2O次在控數(shù)據(jù)后即改用該軟件的ELISA法即均值法進(jìn)行統(tǒng)計分析。
2.結(jié) 果
乙肝5項檢驗結(jié)果采用陰陽性報告并附帶S/C0值，質(zhì)控項目皆以S/C0進(jìn)行統(tǒng)計分析，詳見表1～5 (O.5 ng／ml HBsAg的S/C0值在0.5以下，故未作統(tǒng)計)。
目前臨床免疫推薦使用即刻法對乙肝5項指標(biāo)進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控，它根據(jù)Grubbs剔除離群值檢驗的方法演變而來，具體操作是連續(xù)檢測3次數(shù)值就可以對第3次數(shù)值進(jìn)行均值、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)統(tǒng)計，并根據(jù)公式SI=ⅠXn-XⅠ/Sn,Xn為測定值，x為均值，Sn為標(biāo)準(zhǔn)差。)計算一組數(shù)據(jù)中的某個可疑數(shù)值的SI上限值或下限值，與SI界值表中的相應(yīng)次序的2s或3s的界值進(jìn)行比較。本室采用的是酶標(biāo)儀附帶的質(zhì)控軟件，能自動處理數(shù)據(jù)、自動繪圖和對各項質(zhì)控數(shù)據(jù)進(jìn)行質(zhì)控情況提示，較為方便。統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示：1 ng/ml HBsAg和2 Ncu/ml的抗-HBc存在假在控現(xiàn)象，前者的最大CV值達(dá)到55仍在控，而憑經(jīng)驗應(yīng)屬于失控狀態(tài)；后者則在數(shù)據(jù)累計至2O次后改用ELISA均值法發(fā)現(xiàn)有連續(xù)7次結(jié)果在x軸一側(cè)的趨勢性變化失控，即回顧性分析失控。這些與宋宏先等報道的“即刻法室內(nèi)質(zhì)控存在的問題”一致。即刻法室內(nèi)質(zhì)控假在控的原因分析：(1)前3次的檢測結(jié)果的CV值大小對后續(xù)結(jié)果的影響很大，前3次的CV大，則后面的檢測值即使出現(xiàn)較大的CV值亦顯示在控；否則會出現(xiàn)假失控。本次統(tǒng)計CV值皆在15以上，故未發(fā)現(xiàn)有假失控的現(xiàn)象。陳慧英等采用改良即刻法進(jìn)行免疫實驗的質(zhì)控數(shù)據(jù)統(tǒng)計，即以<25% CV值為控制限來判斷在控與否，這樣便能避免假在控結(jié)果的發(fā)生。(2)影響ELISA 法實驗精密度除方法學(xué)本身的誤差外，日常實驗中酶標(biāo)儀的性能、洗板的質(zhì)量、操作者的質(zhì)量控制意識都是重要因素。我們使用的酶標(biāo)儀存在孔位效應(yīng)，第一排的透光不穩(wěn)定，標(biāo)準(zhǔn)差大；使用連續(xù)式檢測方式，存在結(jié)果交叉干擾的現(xiàn)象，所以改用步進(jìn)式檢測方式，雖然檢速慢，但能使穩(wěn)定性相對提高；我們使用的ST-36W 洗板機(jī)沒有蒸餾水清洗程序，使用中發(fā)現(xiàn)管道內(nèi)容易形成絮片狀的菌膜而不完全堵塞針頭，這樣顯色背景明顯加深，出現(xiàn)假陽性,因此每周用次氯酸溶液清洗管道1次，效果很好。另外，操作人員的質(zhì)量控制意識也很關(guān)鍵：注意標(biāo)本的收取、核對、離心與否，標(biāo)本問交叉污染，結(jié)果的核對，特別是特殊模式的結(jié)果一定要用目測加以復(fù)核，這些均影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，在實驗中有效控制各種影響因素，是做好患者標(biāo)本檢測的有力保證，也是室內(nèi)質(zhì)控的最終目的。
綜上所述，能將日常乙肝5項指標(biāo)室內(nèi)質(zhì)控工作做好，除積極消除各種影響因素外，選用合適的質(zhì)控品十分重要，因為乙肝5項指標(biāo)為免疫定性試驗，統(tǒng)計中發(fā)現(xiàn)陰陽性質(zhì)控品的結(jié)果很穩(wěn)定，如本次統(tǒng)計的全部陽性結(jié)果的抗-HBs和HBeAg及陰性結(jié)果的抗-HBc，而臨界水平的結(jié)果就不穩(wěn)定，如1ng/ml的HBsAg，即灰區(qū)水平，這對血站系統(tǒng)的獻(xiàn)血者篩查尤為重要。因此，明確乙肝各項的具體實驗室檢測靈敏度，采用患者標(biāo)本制備臨界值質(zhì)控品并能檢測出符合允許CV值范圍的室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果，應(yīng)是日后的工作重點(diǎn)。 |
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