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          生物知識

          細(xì)菌內(nèi)毒素微膠粒的解聚

          作者:董光宴 來源:本站 發(fā)布時間: 2011-01-02 18:50  瀏覽次數(shù):
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          細(xì)菌內(nèi)毒素(endotoxin)由革蘭氏陰性菌所產(chǎn)生、存在于菌體內(nèi)的一類毒素,是菌體細(xì)胞壁的組成成分。細(xì)菌在生活狀態(tài)時不釋放,只有當(dāng)菌體自溶或用人工方法使細(xì)胞裂解后才可釋放出來,它不是細(xì)菌的代謝產(chǎn)物。細(xì)菌內(nèi)毒素的化學(xué)成分是磷脂-多糖-蛋白質(zhì)復(fù)合物,其中主要成分是脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),位于細(xì)胞壁的最外層,覆蓋在細(xì)胞壁的粘肽上。脂多糖由三部分組成:O-特異性鏈、核心多糖和類脂A。

             O-特異性鏈:向外由若干個低聚糖的重復(fù)單位組成的多糖鏈,具有特異性。

             核心多糖:分為內(nèi)核心及外核心,外核心由數(shù)種單糖,包括葡萄糖、半乳糖、乙酰氨基葡萄糖等組成。內(nèi)核心含有庚糖及特殊的KDO(3-脫氧-D-甘露糖-辛酮糖)。KDO以不耐酸的酮糖鍵與類脂A的氨基葡萄糖連接。所有G-菌都有此結(jié)構(gòu)。
             類脂A:位于最外層,具有致熱作用,是細(xì)菌內(nèi)毒素的毒性成分。游離的類脂A含有疏水性的中心及親水性的邊緣,是一種雙相分子,可自身凝集成高分子的復(fù)合物,其分子量大小不等。
             LPS是由親水性的多糖和疏水性的類脂A結(jié)合構(gòu)成的一種兩性大分子物質(zhì)。在LPS分子內(nèi),親水性基團(tuán)與疏水性基團(tuán)在空間結(jié)構(gòu)上位于分子兩端,因此,在極性溶媒和非極性溶媒中均能形成微粒樣多聚體。在水溶液中形成的LPS微膠粒,疏水性的類脂A位于多聚體的內(nèi)部,親水性的多糖位于多聚體的外側(cè)(而在脂溶性的溶劑中則相反),其分子量可增大到1×108,在電鏡下呈清晰的微膠粒。在水溶液中,由于多聚體親水表面富含酸性基團(tuán),使得高分子LPS多聚體帶有負(fù)電荷。因此,LPS微膠粒能與溶媒中的Mg2+、Ca2+結(jié)合,從而增強(qiáng)了LPS微膠粒的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。表面活性劑與溶媒中的Mg2+、Ca2+可影響LPS微膠粒的聚合狀態(tài)。通常在無表面活性劑存在 的溶液中,LPS多聚體的分子量超過1×106;在 表面活性劑存在時,LPS多聚體被解聚成(1~2)×104的微膠粒。
              LPS的集聚程度對于其生物學(xué)活性有非常顯著的影響。在測定LPS的活性時,必須以LPS溶解狀態(tài)為前提。在水溶液中形成的LPS微膠粒,由于其主要活性部分類脂A不暴露于水溶液中,因此必須采用一系列的方法使LPS多聚體解聚。
              對于某種特定的LPS,由于集聚程度的不同,生物學(xué)活性可強(qiáng)弱不一。低集聚度的LPS分子表現(xiàn)較強(qiáng)的毒性。相反,高集聚狀態(tài)的LPS多聚體,由于易被細(xì)胞吞噬清除,表現(xiàn)出較低的毒性。不同方法提取的LPS毒性強(qiáng)弱不等,酸法提取的LPS,由于部分a-糖苷鍵被裂解,形成較多游離的類脂A,因此,酸法抽提的LPS毒性較酚法提取的低。LPS其他生物學(xué)活性,如致有絲分裂反應(yīng)及鱟試劑凝集反應(yīng)等活性,也受到LPS集聚程度的影響,聚合狀態(tài)的LPS不能與鱟試劑發(fā)生凝集反應(yīng),必須通過各種方法將其解聚,變?yōu)長PS單體才能較好地使鱟試劑凝集。
              在LPS標(biāo)準(zhǔn)品溶解時,往往不能確定其微膠粒狀態(tài)是否被完全解聚,用旋渦振蕩器一般可以達(dá)到解聚的目的。如有條件可用20KHZ左右的聲波對LPS微膠粒進(jìn)行解聚,通過此種方法可得到均勻分布的LPS單體溶液,但此種單體溶液在溶液中僅能維持約10min左右。




           

                                                                                 



           

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