作者：劉建國 袁惠德 陳祥云 周海敏
【關鍵詞】 注射用鹽酸阿霉素
【摘要】 目的 考察了35批注射用鹽酸阿霉素的細菌內(nèi)毒素檢查法可行性。 方法 《中國藥典》2000年版細菌內(nèi)毒素檢查法。 結果 本品濃度大于2.5mg/ml有干擾作用。 結論 只要把檢品稀釋為2.5mg/ml選用靈敏度為0.5EU/ml的鱟試劑可用細菌內(nèi)毒素檢查。
【關鍵詞】 注射用鹽酸阿霉素;細菌內(nèi)毒素;鱟試劑;熱原;抑制/增加試驗
Study on BET feasibility of doxorubicin hydrochloride with LAL
LIU Jian-guo，YUANHui-de，CHEN Xiang-yun，et al.
Zhejiang Taizhou Prefectural Institute for Drug Control，Zhejinag318000，China
【Abstract】 Objective To inspect on the feasibility of bacterial endotoxin test（BET）for thirty-five batches of doxorubicin hydorchloride for Inj.Methods BET of China pharmacopoeia.Results Interferential effect was shown on the density above2.5mg/ml.Conclusion The dilution of2.5mg/ml could be tested by limulus amebocyte lysate with the sensitivity of0.5EU/ml.
【Key words】 dexorubicin hydrochloride for inj;bacterial endotoxin;limulus amebocyte lysate（LAL）inhibition/strengthen test;pyrogen
注射用鹽酸阿霉素，USP23版早已收載用細菌內(nèi)毒素進行檢測。我國除《浙江省藥品標準》（1993年版）規(guī)定采用兔法進行熱原檢查外，尚末在國內(nèi)文獻和雜志上發(fā)現(xiàn)對此藥的細菌毒素研究。為此，對注射用鹽酸阿霉素的細菌內(nèi)毒素檢測方法進行了探討，現(xiàn)報告如下。
1 實驗材料
1.1 鱟試劑 批號200406041，靈敏度0.5EU/ml，0.1ml/支，10支/盒;湛江安度斯生物有限公司。
1.2 細菌內(nèi)毒素工作標準品 批號0212250，10EU/支，10支/盒;湛江安度斯生物有限公司。
1.3 細菌內(nèi)毒素檢查用水 批號W2003-3，10×10ml/盒，中國藥品生物制品檢定所。
1.4 注射用鹽酸阿霉素 批號20040416，20040823，20040909，20040103，20040223，20040617，規(guī)格10mg/瓶，浙江海正藥業(yè)股份有限公司提供，熱原檢查按《浙江省藥品標準》1993年版符合規(guī)定。
1.5 儀器與設備
1.5.1 微量移液器 50～250μl，200～1000μl上海求精生化試劑儀器有限公司（MC）。
1.5.2 ZH-2自動漩渦混合器 天津藥典標準儀器廠。
1.5.3 電熱恒溫水溫箱 上海浦東榮豐科學儀器有限公司。
1.5.4 S.C101型鼓風電熱恒溫干燥箱 浙江嘉興市新塍電器廠。
2 方法與結果
2.1 鱟試劑靈敏度標定 按《中國藥典》（2000年版）檢查，用細菌內(nèi)毒素檢查用水將細菌內(nèi)毒素工作標準品按1→2等比稀釋成系列濃度的細菌內(nèi)毒素濃度，然后與鱟試劑混合置37℃水浴60min，用反應終點濃度X計算本批鱟試劑靈敏度，即λ 0 =lg -1 ∑X/4=lg -1 （lg0.5+lg0.5+lg0.5+lg0.25）/4=0.35，因λ 0 在0.5λb～2.0λb之間，故以下實驗λb=0.5EU/ml計。
2.2 細菌內(nèi)毒素限值計算 參照美國藥典（1995年版）規(guī)定細菌內(nèi)毒素限值為2.2EU/mg將注射稀釋濃度為1.1EU/mg和《浙江省藥品標準》（1993年版），本品熱原檢查注射劑量為2.25mg/ml，1ml/kg注射。本品細菌內(nèi)毒素理論限值為L（K/D=5EU/2.25mg/ml×1ml/kg×2.25mg/ml=5）。
2.3 本品最大有效稀釋倍數(shù)MVD MVD=L/λb=5/0.5=10倍;λb為鱟試劑靈敏度0.5EU。
2.4 干擾試驗 用無菌、無熱0.9%氯化鈉注射液將樣品稀釋成1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶20系列濃度。以各稀釋濃度樣品將細菌內(nèi)毒素工作標準品按1→2等比稀釋成系列濃度的內(nèi)毒素濃度，以各稀釋濃度的樣品稀釋的內(nèi)毒素系列溶液與鱟試劑混和進行抑制增強試驗。結果見表1。6份樣品的反應結果均相同。
2.5 熱原檢查結果 將6批樣品稀釋10倍與0.5EU靈敏度的鱟試劑混合結果均為陰性，而將6批樣品稀釋10倍加入2λ細菌內(nèi)毒素工作標準品結果均為陽性。6批樣品熱原檢查結果均符合規(guī)定。
3 討論
由表1可知，樣品僅對1∶2稀釋液有干擾作用，但在1∶4稀釋時作用消失。與最大有效稀釋倍數(shù)比較，說明干擾作用不強。
表1 抑制增強試驗結果（略）
用1∶4稀釋對該廠35批熱原檢查符合規(guī)定的樣品進行鱟試劑檢測，結果均符合規(guī)定。與美國藥典（1995年版）規(guī)定的注射用鹽酸阿霉素濃度稀釋為1.1EU/mg比較，《浙江省藥品標準》（1993年版）制訂的熱原檢查稀釋的2.25mg/ml，注射劑量為1ml/kg，比美國藥典要寬了一倍。因此，在我國建立細菌內(nèi)毒素方法學時，考慮該品種的質(zhì)量情況，建議可按美國藥典（1995年版）規(guī)定的注射用鹽酸阿霉素細菌內(nèi)毒素限值為1.1EU/mg為宜。
?。ň庉?李 弋）
作者單位:318000浙江省臺州市藥檢所
318000浙江臺州浙江海正藥業(yè)股份有限公司 |
