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利用雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體(McAb)基本原理是根據(jù)三個(gè)原則:(1)淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的克隆選擇學(xué)說(shuō);(2)雜交瘤細(xì)胞保持雙方親代細(xì)胞特性化;(3)然后大量培養(yǎng)增殖,制備所需的McAb。 一、單克隆抗體的產(chǎn)生 1. 動(dòng)物體內(nèi)誘生方法:目前McAb治療用或體外診斷用的多數(shù)尚采用這一方法制備。先在小鼠腹腔注射液體石蠟或福氏不完全佐劑,一周后將雜交瘤細(xì)胞懸液注射腹腔,1~2周后,無(wú)菌抽取腹水,離心取上清液即可。 2.體外培養(yǎng)法:這是實(shí)驗(yàn)室制備的方法。將雜交瘤細(xì)胞置培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),待培養(yǎng)液顏色改變或細(xì)胞過(guò)多開(kāi)始死亡時(shí),收集上清液,離心去掉碎片及細(xì)胞即可。另一種是雜交瘤細(xì)胞高密度培養(yǎng)法。 二、單克隆抗體的純化及鑒定 目前常用的純化方法有鹽析、凝膠過(guò)濾、離子交換層析和辛酸提取等方法。 單克隆抗體性質(zhì)鑒定方法如放免測(cè)定、補(bǔ)體介導(dǎo)溶血試驗(yàn)、ELISA、免疫酶、玫瑰花結(jié)形成試驗(yàn)等,最常用的為ELISA方法,一般先作定性試驗(yàn),如陽(yáng)性,進(jìn)一步作定量檢測(cè)。 |
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