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          生物知識(shí)

          常用生化試劑作用

          作者:admin 來源:本站 發(fā)布時(shí)間: 2010-12-24 08:35  瀏覽次數(shù):
          購買進(jìn)口儀器、試劑和耗材——就在始于2001年的畢特博生物 m.kjhfd.cn

          1.蛋白酶K:

          能水解消化蛋白質(zhì),特別是與DNA結(jié)合的組蛋白。再尿素和SDS中穩(wěn)定。一般工作濃度是50—100μg/ml,推薦反應(yīng)緩沖液:50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2。

          2.SDS:

                十二烷基硫酸鈉. 溶解細(xì)胞膜上的脂類與蛋白質(zhì),因而溶解膜蛋白而破壞細(xì)胞膜,并解離細(xì)胞中的核蛋白,SDS 還能與蛋白質(zhì)結(jié)合而沉淀

          3.IPTG

                異丙基-β-D-硫代半乳糖苷, 常用于藍(lán)白斑篩選及IPTG誘導(dǎo)的細(xì)菌內(nèi)的蛋白表達(dá)等. IPTG和乳糖的結(jié)構(gòu)相似,所以它和乳糖一樣,可以與乳糖操縱元的阻遏蛋白結(jié)合,使阻遏蛋白的空間構(gòu)像變化,四聚體解聚成單體,失去與操縱子特異性結(jié)合的能力,從而解除了阻遏蛋白的作用,使其后的基因得以轉(zhuǎn)錄合成利用乳糖的酶類。與乳糖不同的是,IPTG不被 β-半乳糖苷酶水解。常與X-GAL一起用于藍(lán)白斑篩選。作用極強(qiáng)的誘導(dǎo)劑,不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定

          4.X-gal

          5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷,是IPTG的顯色試劑,在IPTG的催化下顯藍(lán)色。常跟IPTG一起用與藍(lán)白斑篩選。

          5.G418:

               一種抗生素,對(duì)幾乎所有的細(xì)胞都有毒性,是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染最常用的選擇試劑。當(dāng)neo基因被整合進(jìn)真核細(xì)胞基因組合適的地方后 ,則能啟動(dòng)neo基因編碼的序列轉(zhuǎn)錄為mRNA,從而獲得抗性產(chǎn)物氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶的高效表達(dá) ,使細(xì)胞獲得抗性而能在含有G418的選擇性培養(yǎng)基中生長。G418的這一選擇特性 ,已在基因轉(zhuǎn)移、基因敲除、抗性篩選以及轉(zhuǎn)基因動(dòng)物等方面得以廣泛應(yīng)用。

          6.DMSO

                二甲基亞砜.實(shí)驗(yàn)室常用于作液體層析溶劑,同時(shí)用作測(cè)試物質(zhì)紫外消光值上時(shí)用作參照物.能溶于所有烷烴和烯烴。

          7.曲拉通X-100

          TritonX-100.用的細(xì)胞裂解液成分之一,在保護(hù)蛋白活性方面有一定作用. 能力介于NP40和SDS之間,偏向于NP40

          8.NP-40

                很溫和的去垢劑,1%濃度的基本可以破壞掉胞膜,而對(duì)核膜破壞的作用弱,結(jié)合特定的buffer可以獲得胞漿蛋白。

          9、BSA

          牛血清白蛋白. 主要起維持滲透壓作用、PH緩沖作用、載體作用和營養(yǎng)作用。在動(dòng)物細(xì)胞無血清培養(yǎng)中,添加白蛋白可起到生理和機(jī)械保護(hù)作用和載體作用。常用于蛋白定量中的內(nèi)參和抗體稀釋液。

          10.甲酰胺

               甲酰胺被用作凝膠電泳中RNA的穩(wěn)定劑,也用于穩(wěn)定毛細(xì)管電泳中的變性單股DNA。

          11.TEMED

                 四甲基乙二胺。促凝劑。在中性及堿性pH條件下,加入TEMED可加速凝膠聚合

          12.巰基乙醇

                 一種強(qiáng)還原劑??蛇€原蛋白二硫鍵,從而使蛋白保持溶解狀態(tài),有利于與SDS的結(jié)合。使蛋白解離成單個(gè)亞基。

          13.甲叉雙丙烯酰胺

          N,N'-甲叉雙丙烯酰胺,別名MBA,又叫亞甲基雙丙烯酰胺,次甲基雙丙烯酰胺,N,N'-甲撐雙丙烯酰胺。作交聯(lián)劑與丙烯酰胺聚合而制備聚丙烯酰胺凝膠。

          14.過硫酸銨

                 過硫酸銨(APS)的作用主要是提供自由基,然后在促凝劑TEMED的作用下使丙烯酰胺及甲叉丙烯酰胺聚合。

          15.B27

               一種添加劑,用于神經(jīng)肝細(xì)胞培養(yǎng),被認(rèn)為具有抑制膠質(zhì)細(xì)胞生長的作用。

          16.DTT

                 二硫蘇糖醇,常用還原劑,既有抗氧化作用。它能保護(hù)酶分子上的還原性基團(tuán),維持還原性環(huán)境,穩(wěn)定酶的活性。又是一種蛋白質(zhì)變性劑,破壞二硫鍵,濃度不同,起到的作用也不同。

          17.弗氏不完全佐劑和弗氏完全佐劑

               弗氏完全佐劑是一種油包水的乳濁液,含結(jié)核分枝桿菌的細(xì)胞壁成分。佐劑活性來自于油滴中免疫原的持續(xù)釋放,并刺激局部免疫反應(yīng)。弗氏不完全佐劑用于初次免疫刺激。為了減少副作用,不含結(jié)核分枝桿菌成分的弗氏不完全佐劑用于加強(qiáng)免

                氏完全佐劑是一種油包水的乳濁液,能夠非常有效的誘導(dǎo)產(chǎn)生高滴度的抗體。弗氏完全佐劑含結(jié)核分枝桿菌的細(xì)胞壁成分,可以加強(qiáng)對(duì)抗原的抗體反應(yīng)。佐劑活性來自于油滴中免疫原的持續(xù)釋放,并刺激局部免疫反應(yīng)。

          18.吐溫 20   Tween-20 ,常用的非離子去垢劑。

          19.吐溫 80    Tweenum 80 ,除作乳化劑外,也用作某些水中難溶藥物的增溶劑。

          20.十二烷基肌氨酸鈉        脫細(xì)胞試劑,制備脫細(xì)胞組織工程支架材料

          21.PVPP

          PVPP對(duì)片劑具有崩解作用,能和各種不溶于水的藥物共容,能穩(wěn)定化各種懸浮劑,又具有形成絡(luò)合物的能力以及吸附作用等,因而可用作醫(yī)藥助劑。也用于除去啤酒中的多酚。

          22.PIPES

          哌嗪-N,N'-二(2-乙磺酸),實(shí)驗(yàn)室做緩沖劑用。全名是哌嗪-N,N-二(2-乙磺酸),pKa是6.80。不參與也不干擾生物化學(xué)反應(yīng),價(jià)格比較貴。常用在免疫和細(xì)胞類的實(shí)驗(yàn)中,PIPES有時(shí)還被用來制備大腸桿菌感受態(tài)。

          23.CTAB

                 十六烷基三乙基溴化銨,一種去污劑,可溶解細(xì)胞膜,它能與核酸形成復(fù)合物,在高鹽溶液中((0.7 mol/L NaCl)是可溶的,當(dāng)降低溶液鹽濃度到一定程度(0.3 mol/L NaCl)時(shí),從溶液中沉淀,通過離心就可將CTAB-核酸的復(fù)合物與蛋白,多糖類物質(zhì)分開。最后通過乙醇或異丙醇沉淀DNA,而CTAB溶于乙醇或異丙醇而除去。CTAB法是現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室最常用的一種提取核酸的手段。

          24、HEPES

                 羥乙基哌秦乙硫磺酸,一種弱酸緩沖劑,主要作用是防止培養(yǎng)基pH迅速變化。在開放式培養(yǎng)條件下,培養(yǎng)基脫離了5%CO2的環(huán)境,CO2氣體迅速逸出,pH迅速升高,若加了HEPES,此時(shí)可以維持pH7.0左右。一般在進(jìn)行克隆化培養(yǎng)時(shí)要添加HEPES

          25

          MOPS

                 一種緩沖液,有抑制RNA酶的作用,一般和甲醛(用于變形RNA)用于RNA變性電泳

          26

          鹽酸胍

                 鹽酸胍等可使蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中的氫鍵發(fā)生斷裂,這增加了非極性分子包括氨基酸側(cè)鏈的溶解度,減少了疏水相互作用。

          27

          PMSF

          Phenylmethanesulfonyl fluoride,中文名為苯甲基磺酰氟。用于抑制蛋白酶. PMSF嚴(yán)重?fù)p害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚,吸入、吞進(jìn)或通過皮膚吸收后有致命危險(xiǎn)。一旦眼睛或皮膚接觸了PMSF,應(yīng)立即用大量水沖洗之。凡被PMSF污染的衣物應(yīng)予丟棄。PMSF在水溶液中不穩(wěn)定。應(yīng)在使用前從貯存液中現(xiàn)用現(xiàn)加于裂解緩沖液中。PMSF在水溶液中的活性喪失速率隨pH值的升高而加快,且25℃的失活速率高于4℃。pH值為8.0時(shí),20μmmol/l PMSF水溶液的半壽期大約為85min,這表明將PMSF溶液調(diào)節(jié) 為堿性(pH>8.6)并在室溫放置數(shù)小時(shí)后,可安全地予以丟棄。 28

          溴酚藍(lán)

          pH指示劑,pH=3.0時(shí)呈黃色,pH=4.6時(shí)呈藍(lán)紫色。酸堿指示劑;非水滴定用指示劑,蛋白電泳染色;病毒化驗(yàn)等。

          29

          臺(tái)盼蘭

          臺(tái)盼藍(lán)(Trypan Blue)或稱臺(tái)盼蘭,是細(xì)胞活性染料,常用于檢測(cè)細(xì)胞膜的完整性

          30

          二甲苯青FF

          用于瓊脂糖聚丙烯酰胺凝膠電泳的示蹤染料, 易溶于水和醇,可與溴芬藍(lán)按照一定比例配置loading buffer

          31

          吖啶橙

          是一種熒光色素,與細(xì)胞中DNA和RNA結(jié)合量存在差別,可發(fā)出不同顏色的熒光,與DNA結(jié)合量少發(fā)綠色熒光,與RNA結(jié)合量多發(fā)桔黃色或桔紅色熒光。該染料具有膜通透性,能透過細(xì)胞膜,使核DNA和RNA染色。在熒光顯微鏡下觀察,吖啶橙可透過正常細(xì)胞膜,使細(xì)胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光;而在凋亡細(xì)胞中,因染色質(zhì)固縮或斷裂為大小不等的片斷,形成凋亡小體。吖啶橙使其染上致密濃染的黃綠色熒光,或黃綠色碎片顆粒;而壞死細(xì)胞黃熒光減弱甚至消失。吖啶橙AO常與溴化乙啶EB合用雙染,因EB只染死細(xì)胞使之產(chǎn)生桔黃色熒光,由此可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞.它還可以用作移碼突變的誘變劑,能鑲嵌于兩個(gè)相鄰的堿基對(duì)之間,這樣在DNA復(fù)制過程中,會(huì)使DNA鏈增加或缺失一個(gè)堿基,造成移碼突變。吖啶橙染液有毒,操作時(shí)要戴手套,需避光。

          32、EDTA和EGTA

          EDTA--乙二胺四乙酸EDTA是螯合劑的代表性物質(zhì)。能和堿金屬、稀土元素和過渡金屬等形成穩(wěn)定的水溶性絡(luò)合物。此外EDTA也可用來使有害放射性金屬從人體中迅速排泄起到解毒作用。也是水的處理劑。EGTA--乙二醇雙(2-氨基乙基)四乙酸在.Mg2+存在下測(cè)定Ca2+時(shí),可用EGTA直接滴定,滴定誤差小于0.3% ,比用EDTA滴定提高了選擇性..此外它與金屬離子形成的配合物的穩(wěn)定性普遍比相應(yīng)的EDTA配合物差。

          33.、TRICINE

          N-[三(羥甲基)甲基]甘氨酸, 常見的電泳系統(tǒng)是Tris-甘氨酸系統(tǒng);Tris-Tricine電泳則用于分子量小于10kDa的多肽和蛋白的電泳,能夠獲得較好的分離效果. 可以用前者代替。

          34、PVP40

          PVP40 中的CO - N = 有很強(qiáng)的結(jié)合酚類化合物的能力, 與其形成穩(wěn)定的復(fù)合物, 常用于提取RNA時(shí)除去酚類。

          35、脫氧膽酸鈉

          離子型去垢劑,作用有:1、

          裂解細(xì)胞;2、

          溶解蛋白,尤其是可以溶解一些難溶于水的蛋白,如膜蛋白等;3、很適合做WB,但在Co-IP中使用,需要謹(jǐn)慎

          36、6-BA

          細(xì)胞培養(yǎng)中用到,細(xì)胞分裂素。

          37、碘代乙酰胺

          也叫作碘乙酰胺,2-碘乙酰胺. 用于有機(jī)合成,在蛋白組學(xué)中組氨酸和半胱氨酸的烷基化試劑,用于多肽測(cè)序以及酶抑制劑等,蛋白組學(xué)級(jí)試劑

          38、萘乙酸

          NAA,為廣譜性植物生長調(diào)節(jié)劑,可促進(jìn)細(xì)胞分裂,誘導(dǎo)形成不定根,改變雌雄花比例,增加坐果率等

          39、番紅O

          藏紅T;

          氧化還原指示劑;生物染色;酸堿指示劑;滴定分析亞硝酸鹽。

          40、TTC

          2,3,5-三苯基氯化四氮唑(紅四氮唑),多用于藥物分析和瓊脂糖添加劑,在計(jì)數(shù)瓊脂中加入適量的TTC(0.5% TTC 1ML加到100ML瓊脂中),細(xì)菌菌落長成紅顏色,對(duì)去除食品本底顆粒物干擾非常有意義.
           

          無血清培養(yǎng)基UltraCULTURE Serum-free Medium

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