<mark id="bahkc"><acronym id="bahkc"></acronym></mark>

          国产精品久久久久久不卡_欧美激情精品久久_99久久免费精品国产72精品九九_精品熟人妻一区二区三区四区不卡_国产麻豆精品一区二区三区

          ?
          生物知識(shí)

          HIV抗體ELISA測定中影響因素探討

          作者:陸亭屹 徐萍 來源:《中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)網(wǎng)》 發(fā)布時(shí)間: 2010-12-08 22:49  瀏覽次數(shù):
          購買進(jìn)口儀器、試劑和耗材——就在始于2001年的畢特博生物 m.kjhfd.cn

          作者:陸亭屹 徐萍    作者單位:黔南州疾病預(yù)防控制中心,貴州 黔南 558000

           HIV抗體檢測是發(fā)現(xiàn)HIV感染的有效途徑,而對(duì)疑似艾滋病HIV感染者的實(shí)驗(yàn)確診是防治艾滋病的重要環(huán)節(jié)。隨著我國HIV感染人數(shù)的逐年增加,人們對(duì)艾滋病病毒的檢測日益重視。酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測HIV抗體是衛(wèi)生部推薦的首選方法,此法特異性強(qiáng),靈敏度高,操作簡單易行,既適宜于大樣本的篩查試驗(yàn),也可用于單個(gè)樣本的測定,但檢測結(jié)果的正確性易受多種因素的影響。為進(jìn)一步提高HIV初篩實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量,保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性,最大限度減少HIV抗體檢測可能出現(xiàn)的誤差,本文對(duì)實(shí)驗(yàn)室中溶血血清、不同的血清量、溫育時(shí)間、終止比色時(shí)間等影響的因素加以探討。

            1  材料與方法

            1.1 儀器   

            BIO-R55O型酶標(biāo)儀(美國產(chǎn));Fluido型洗板機(jī)(鄭州產(chǎn));干式孵育箱(上海市醫(yī)療器械廠生產(chǎn));E06010122型移液器(日本產(chǎn))。

            1.2 試劑  

            A試劑:北京萬泰公司生產(chǎn)的ELISA抗2HIV(1+2)抗體試劑盒(批2批檢合格,批號(hào)20070909)。B試劑:新創(chuàng)公司生產(chǎn)的ELISA抗2HIV(1+2)抗體試劑盒(批2批檢合格,批號(hào)2007076605)。由貴州省疾控中心艾滋病防治所供給。

            1.3 樣品  

            取自都勻市少管所監(jiān)測點(diǎn)的HIV抗體初篩陽性血清。

            1.4 方法  

            取10份HIV初篩的陽性血清,每份血又分為兩份,一份是正常分離的非溶血血清,另一份是通過人為機(jī)械溶血分離的血清。用兩個(gè)不同生產(chǎn)廠家的ELISA抗2HIV(1+2)試劑盒,操作嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行,在有效期內(nèi)使用。在相同的溫度下,對(duì)同一樣品進(jìn)行不同血清(非溶血與溶血)、不同血清量(萬泰100 μl全量、50 μl,新創(chuàng)50 μl全量、25 μl)、不同溫育時(shí)間(37℃溫育30 min與20 min及加終止液后立即比色,5 min、10 min、15 min、20 min、25 min、30 min等不同時(shí)間比色進(jìn)行比較。判斷臨界值的設(shè)定北京萬泰為Cut off值=0.12+N(陰性對(duì)照平均值), 英科新創(chuàng)為Cut off值=0.10+N(陰性對(duì)照平均值),樣本OD值小于Cut off值為陰性,大于或等于Cut off值為陽性。

            2   結(jié)果

            2.1 兩種試劑同時(shí)測定非溶血與溶血樣本HIV抗體,兩樣本的OD值差異均無顯著性(P>0.05),與有關(guān)報(bào)導(dǎo)不同[1,2](見表1)。
          表1   非溶血與溶血血清OD值比較略(

            2.2 不同溫育時(shí)間的比較  

            兩種試劑的結(jié)果各不相同,A試劑非溶血與溶血樣本37℃溫育30 min和20 min之間OD值差異無顯著性(P>0.05)。B試劑37℃溫育30 min和20 min之間OD值差異有顯著性(P<0.01,見表2)。表2   不同溫育時(shí)間OD值比較 (略)

            2.3 HIV抗體陽性血清樣本不同血清量結(jié)果OD值差異均有顯著性(P<0.05,見表3)。表3  不同血清量OD值比較(略)

            2.4 加終止液后用雙波長(450 nm,630 nm)在不同時(shí)間掃描(比色)對(duì)結(jié)果的影響

            加終止液后隨著時(shí)間的增加,OD值逐漸下降,而且濃度越高其OD值隨時(shí)間下降越快。在本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)弱陽性的HIV質(zhì)控血清,其OD隨時(shí)間增加而變化較小。陽性血清OD值比色時(shí)間延遲 5 min后,各時(shí)間段與第一次相比 ,結(jié)果有明顯變化(見表4)。從表中看出比色時(shí)間對(duì)ELISA的檢測結(jié)果影響明顯。表4   不同時(shí)間比色OD值兩兩比較(略)
            3  討論
           
            在ELISA試驗(yàn)中溶血標(biāo)本對(duì)HBsAg和麻疹抗體測定的影響均有報(bào)道[3,4], 對(duì)HIV抗體測定的影響報(bào)道少見,本次實(shí)驗(yàn)用A、B兩種試劑對(duì)非溶血和溶血標(biāo)本測定HIV抗體的OD值比較,兩種血清OD值結(jié)果間差異均無顯著性(P>0.05),雖然溶血標(biāo)本對(duì)ELISA測定HIV抗體結(jié)果影響較小,但在測定HIV抗體時(shí),抽血和分離血清應(yīng)盡量避免溶血,但對(duì)抽血困難和運(yùn)輸過程中造成個(gè)別溶血標(biāo)本應(yīng)多次反復(fù)測定,警惕假陽性出現(xiàn),以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。
           
            溫育時(shí)間是影響ELISA法測定HIV抗體結(jié)果可靠性的關(guān)鍵因素之一。溫育時(shí)間不夠,會(huì)導(dǎo)致弱陽性樣本漏檢,溫育時(shí)間過長,液體蒸發(fā),使非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗徹底。在相同溫度下,不同溫育時(shí)間的OD值比較,萬泰試劑與新創(chuàng)試劑的結(jié)果有所不同,說明不同生產(chǎn)廠家的試劑對(duì)溫育時(shí)間敏感性不同。因此,在實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)按說明書步驟嚴(yán)格控制溫育時(shí)間,以保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。
           
            本次結(jié)果表明陽性血清量的多少對(duì)結(jié)果的準(zhǔn)確性影響很大。筆者認(rèn)為:操作過程中樣本及試劑應(yīng)垂直加樣,不可太快,若加樣過快,容易濺出和產(chǎn)生氣泡,難以保證加樣量的準(zhǔn)確性。 非垂直加樣易加在微孔非包被區(qū),致非特異性吸附. 加樣過猛易使樣本(試劑)濺出對(duì)鄰近孔產(chǎn)生污染,產(chǎn)生氣泡使液面差異致酶標(biāo)儀測定出現(xiàn)誤差,為確保加入試劑的準(zhǔn)確性,應(yīng)使用精密移液器,不可使用滴瓶滴加。
           
            從表4可見,加終止劑后,在不同時(shí)段讀取各孔OD值與第一次進(jìn)行比較,結(jié)果差異有顯著性 (P<0.01)。各時(shí)間段與前一次比較,A試劑10 min以后各時(shí)段與前一次比較差異均無顯著性(P>0.05),而B試劑25 min以前各時(shí)段與上一次比較差異均有顯著性(P<0.01)。說明不同生產(chǎn)廠家的試劑在加終止液后隨著時(shí)間的增加,OD值下降的速度不同。目前各生產(chǎn)廠家的HIV抗體篩查試劑,加終止劑后沒有規(guī)定具體的比色時(shí)間,建議各試劑生產(chǎn)廠家應(yīng)對(duì)其最佳的時(shí)間加以說明。本次結(jié)果顯示,加終止劑后5 min比色結(jié)果比較理想,實(shí)驗(yàn)樣本數(shù)量有限,有待大樣本證實(shí)。
           
            掌握HIV初篩實(shí)驗(yàn)室基本操作技能和技術(shù),每一步操作應(yīng)認(rèn)真仔細(xì),嚴(yán)格按說明書進(jìn)行對(duì)操作環(huán)節(jié)各方面的影響應(yīng)全面的了解,并能進(jìn)行有效控制,提高HIV初篩實(shí)驗(yàn)室的HIV抗體檢測準(zhǔn)確率,為艾滋病的控防工作提供科學(xué)依據(jù)。

          【參考文獻(xiàn)】
              [1] 殷勤. 溶血對(duì)抗-HIV測定結(jié)果的影響[J].實(shí)用醫(yī)技雜志,2004,11(10):2142-2143.

            [2] 劉國剛, 鐘海明, 胡金元.ELISA法檢測HIV抗體的幾點(diǎn)體會(huì)[J].中華醫(yī)學(xué)實(shí)踐雜志,2004,3(10):907.

            [3] 鐘筑寧, 谷俊瑩, 肖文革. 對(duì)影響ELISA實(shí)驗(yàn)質(zhì)量的有關(guān)因素分析[J].貴州醫(yī)藥,2005,29(12):1131-1132.

            [4] 黎劍華, 鄭澤紅.酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)一步法檢測麻疹I(lǐng)gM抗體影響因素探討[J].中華現(xiàn)代兒科學(xué)雜志,2005,2(7):642-643.


          聲明:各媒體轉(zhuǎn)載請自覺注明文章來自《中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)網(wǎng)》(www.labweb.cn)!

          購買進(jìn)口儀器、試劑和耗材——就在始于2001年的畢特博生物 m.kjhfd.cn

          所有試劑均用于科研 ???? 北京畢特博生物技術(shù)有限責(zé)任公司 版權(quán)所有
          服務(wù)熱線:010-82015225/400-833-9299 | 傳真:010-62015131 | E-mail:info@bitebo.com
          京ICP備05028556號(hào)-1 ??京公網(wǎng)安備11010802008747??

          亚洲av无码乱码在线观看裸奔_欧美激情精品久久_99久久免费精品国产72精品九九_精品熟人妻一区二区三区四区不卡

          <mark id="bahkc"><acronym id="bahkc"></acronym></mark>