檢測(cè)丙型肝炎抗體試驗(yàn)于1990年在食品與藥品管理局(FDA)首次注冊(cè)，自那時(shí)起，新版的此類試驗(yàn)和其他FDA批準(zhǔn)的抗一HCV試驗(yàn)已廣泛運(yùn)用于臨床診斷和無(wú)癥狀病人的篩檢。
CDC建議對(duì)于被認(rèn)為具有HCV感染血清學(xué)證據(jù)的人，如其只是抗一HCV篩檢陽(yáng)性的話，應(yīng)由更為特異的血清學(xué)試驗(yàn)(如重組免疫印跡試驗(yàn)[RIBA])或核酸試驗(yàn)證實(shí)。然而。對(duì)于抗一HCV的檢測(cè)，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室只根據(jù)篩檢的陽(yáng)性結(jié)果報(bào)告為陽(yáng)性，而不用更為特異的血清學(xué)和核酸試驗(yàn)對(duì)這些結(jié)果加以證實(shí)，除非送檢醫(yī)師要求。
實(shí)驗(yàn)室不開(kāi)展旁證試驗(yàn)的原因很多，包括缺乏實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)、對(duì)篩檢和旁證試驗(yàn)的開(kāi)展及結(jié)果解釋缺乏理解、以及其高額費(fèi)用。在建議的抗-HCV檢測(cè)程序中包括了使用篩檢陽(yáng)性是s/co比值(signal-to-cut-0ff)。以減少需要旁證試驗(yàn)標(biāo)本的數(shù)量和提供更可靠地反映受檢者真實(shí)抗體狀態(tài)的檢測(cè)結(jié)果。
現(xiàn)有的抗一HCV篩檢法：在美國(guó)使用的經(jīng)FDA注冊(cè)或批準(zhǔn)的抗一HCV篩檢試劑盒包括三種免疫法：二種酶免疫法(HCV EIA 2.0、HCV ELISA 3.0)和一種加強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光免疫法(CLA)。所有這些免疫法都使用HCV一編碼重組抗原。
現(xiàn)有的旁證試驗(yàn)：旁證試驗(yàn)包括一種血清學(xué)抗一HCV試驗(yàn)和檢測(cè)HCV RNA的核酸試驗(yàn)(NATs)。在美國(guó)唯一經(jīng)FDA注冊(cè)的抗一HCV的旁證試驗(yàn)是重組免疫印跡試驗(yàn)(RIBA)。此方法既使用HCV一編碼重組抗原，也使用合成肽。因其是一種血清學(xué)試驗(yàn)，可用抗一HCV篩檢試驗(yàn)中使用的同一血清和血漿標(biāo)本進(jìn)行此項(xiàng)試驗(yàn)。 臨床實(shí)驗(yàn)室
FDA批準(zhǔn)的用于HCV RNA定性檢測(cè)的診斷性NATs。運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄酶鏈反應(yīng)(TR一PCR)擴(kuò)增技術(shù)，包括AMPLICOR丙肝病毒(HCV)試驗(yàn)(2.0版)和COBASAMPLICOR丙肝病毒試驗(yàn)(2.0版)。運(yùn)用這兩種試驗(yàn)檢測(cè)HCV RNA要求按適合NAT的方式收集、處理血清和血漿標(biāo)本，并在具有專項(xiàng)設(shè)施的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。
篩檢免疫法試驗(yàn)結(jié)果：抗一HCV檢測(cè)包括最初的免疫法篩檢。解釋抗一HCV免疫法的陽(yáng)性反應(yīng)結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)以臨床研究數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)。對(duì)于HCV EIA2.0、HCV ELISA3.0而言。呈陽(yáng)性反應(yīng)的標(biāo)本分麗組進(jìn)行再檢。如果每組試驗(yàn)都呈陽(yáng)性反應(yīng)，標(biāo)本即被認(rèn)為雙陽(yáng)性，即篩檢陽(yáng)性。對(duì)于QA8而言，只要其中一份標(biāo)本具有陽(yáng)性反應(yīng)即可認(rèn)為篩檢陽(yáng)性，不需要重檢。
HCV EIA2.0和HCV ELISA3.0特異性在99%以上。然而。在低感染率人群中，高達(dá)99%的特異性也不能保證理想的陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果。在抗一HVC流行率<10%的免疫活性人群中，HCV EIA2.0和HCV ELISA3.0的假陽(yáng)性率平均約為35%(15%一60%)。在免疫抑制人群中(如血液透析病人)，假陽(yáng)性率平均約為15%?；谶@個(gè)原因，不能僅僅依靠抗一HCV篩檢陽(yáng)性結(jié)果判斷一個(gè)人已經(jīng)感染HCV。更為確切地說(shuō)，篩檢陽(yáng)性結(jié)果應(yīng)由一項(xiàng)更具特異性的旁證試驗(yàn)證實(shí)。.
血清學(xué)旁證實(shí)驗(yàn)結(jié)果：重組免疫印跡試驗(yàn)(砌隊(duì))這種高特異性的抗一HCV旁證試驗(yàn)運(yùn)用于檢測(cè)篩檢陽(yáng)性標(biāo)本，檢測(cè)結(jié)果解釋為陽(yáng)性j陰性和不確定。RIBA陽(yáng)性結(jié)果解釋為抗一HCV陽(yáng)性，雖然抗一HCV的存在并不能區(qū)分現(xiàn)有感染和既往感染，但明確的抗一HCV陽(yáng)性結(jié)果表明應(yīng)對(duì)HCV感染進(jìn)行會(huì)診和醫(yī)療評(píng)估，包括對(duì)病毒的存在和肝病的進(jìn)一步檢驗(yàn)(如核酸試驗(yàn)檢測(cè)HCV RNA和檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶[ALT])?？挂籋CV試驗(yàn)在其結(jié)果明確為陽(yáng)性后一般不需要重檢。
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RIBA陰性解釋為抗一HCV陰性，并表明篩檢試驗(yàn)結(jié)果為假陽(yáng)性。具有代表意義的是，抗一HCV試驗(yàn)結(jié)果陰性(篩檢陰性和RIBA陰性)的人員被認(rèn)為未感染，然而，在感染后第一周內(nèi)抗一HCV檢測(cè)結(jié)果可能為假陰性(即在抗體可檢測(cè)出前和血清陽(yáng)轉(zhuǎn)期問(wèn))，雖然HCV RNA在暴露后早期(1—2周)就可檢出。很少有人在暴露后抗體延遲數(shù)月才陽(yáng)轉(zhuǎn)。在一些HCV感染自愈的人員中，抗一HCV下降到可檢測(cè)水平以下。有時(shí)HCV慢性感染者(包括免疫抑制者)的抗一HCV呈持續(xù)性下降。檢測(cè)出HCV RNA可能是感染的唯一證據(jù)。
RIBA結(jié)果不確定表示抗一HCV不確定。最近在正處于血清陽(yáng)轉(zhuǎn)期的感染人員中發(fā)現(xiàn)有抗一HCV旁證試驗(yàn)結(jié)果不確定的情況，這種情況有時(shí)也發(fā)生在HCV慢性感染者中。不確定也可表示篩檢結(jié)果假陽(yáng)性，這也是HCV感染低危人群中此種結(jié)果的最常見(jiàn)的解釋。虛男采集一份標(biāo)本，對(duì)抗一HCV作再次檢測(cè)(1月后)或檢測(cè)HCV RNA。
核酸旁證試驗(yàn)結(jié)果：檢測(cè)HCV RNA的核酸試驗(yàn)可用作檢測(cè)抗一HCV的旁證試驗(yàn)。它們運(yùn)用于急性和慢性HCV的臨床診斷、慢性丙肝病人的評(píng)估和管理。
如果NAT試驗(yàn)陽(yáng)性且篩檢結(jié)果也陽(yáng)性。NAT就有既能檢測(cè)出活動(dòng)性HCV感染，又能證實(shí)抗一HCV的存在的優(yōu)點(diǎn)。如果NAT試驗(yàn)陰性，而篩檢試驗(yàn)陽(yáng)性，那么HCV抗體或感染狀態(tài)就不能確定。這時(shí)就需做RIBA試驗(yàn)，以證實(shí)抗一HCV的檢測(cè)結(jié)果和決定是否需要會(huì)診和醫(yī)療評(píng)估，而如果抗一HCV篩檢試驗(yàn)結(jié)果被證明為假陽(yáng)性(如RIBA陰性)。那么就不需要作進(jìn)一步的評(píng)估。而如果抗一HCV篩檢試驗(yàn)結(jié)果經(jīng)RIBA證實(shí)為陽(yáng)性，那么就需要進(jìn)行醫(yī)療評(píng)估。包括系列的HCV RNA和ALT活性測(cè)定。
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有這樣的情況存在，即一個(gè)處于活動(dòng)性HCV感染期的人，其HCV RNA的檢測(cè)結(jié)果可能為陰性。隨著急性感染期抗一HCV滴度的增高，HCV RNA的滴度下降，因此一些丙肝急性感染期病人的HCV RNA也就不能檢出，但這種情況是短暫的，慢性感染可能出現(xiàn)。另外，在慢性HCV感染人員中觀察到HCv RNA的陽(yáng)性結(jié)果呈間斷性。因此，在缺乏進(jìn)一步臨床信息的情況下，一次HCV RNA陽(yáng)性結(jié)果的意義就不明確。是否需要進(jìn)一涉的醫(yī)療評(píng)估須通過(guò)證實(shí)抗一HCV狀況來(lái)決定。
HCV RNA檢測(cè)結(jié)果陰性也可表示感染自愈，在成年期(45歲以上)感染HCV的抗一HCV陽(yáng)性者中，15%一25%的感染明顯自愈，兒童期和青年期感染的抗一HCV陽(yáng)性者中這一比例較高(40%一45%)。為了明確HOT感染是否自愈，HCV—RNA的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)多次證實(shí)為陰性。然而，此類后續(xù)試驗(yàn)只在經(jīng)血清學(xué)實(shí)驗(yàn)明確為抗一HCV陽(yáng)性的人員中需要。
利用篩檢陽(yáng)性deo比值確定是否需要旁證實(shí)驗(yàn)：對(duì)早期眥HCV EIA檢測(cè)自愿獻(xiàn)血者血樣結(jié)果的分析表明，重復(fù)陽(yáng)性反應(yīng)的s／co的平均比值可用于預(yù)測(cè)旁證實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性結(jié)果。利用HCV ELISA3.0檢測(cè)自愿獻(xiàn)血者血樣也得到類似數(shù)據(jù)。在這些分析中，24，700份重復(fù)呈抗一HCV陽(yáng)性反應(yīng)血樣的s／co比值與其RIBA3.0結(jié)果進(jìn)行了比較，共64.O%的血樣呈RIBA陽(yáng)性，平均deo比值為1.0—2.9的RIBA陽(yáng)性血樣的比例為5.8%；平均s／co比值為3.0—3.4的比例為37.1%；平均deo比值為3.5—3.7的比例為67%；平均s／co比值為3.8—3.9的比例為88.1%；平均s／co比值大于4.O的比例為94.1%。。 clin-lab.com
CDC還從其它人群另得到了一些數(shù)據(jù)，以判斷能否確定一種特異的s／co比值，而這種比值能預(yù)測(cè)當(dāng)時(shí)95%以上的真抗體陽(yáng)性結(jié)果，而不管檢測(cè)人口抗一HCV陽(yáng)性率和人群特征。經(jīng)評(píng)估的抗一HCV篩檢試驗(yàn)是二種FDA注冊(cè)的EIAs(HCV EIA 2.0和HCV ELISA3.O)和一種FDA批準(zhǔn)的CIA(VITORS抗一HCV試驗(yàn))。
EIAs：所有EIA篩檢陽(yáng)性的標(biāo)本都由RIBA3.0進(jìn)行了檢測(cè)，并且每份篩檢陽(yáng)性標(biāo)本的HCV RNA還由下列兩種或以上的方法進(jìn)行了檢測(cè)(轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增[TMA]、AMPLICOR和套式RT—PCR。利用了由CDC主持的無(wú)癥狀人群抗一HCV血清流行率研究的血清標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果，抗一HCV血清抗體流行率從0.8%到25%不等。
篩檢試驗(yàn)陽(yáng)性并由RIBA證實(shí)為抗一HCV陽(yáng)性結(jié)果的比例隨著人群中抗一HCV流行率的增加而增加，相反，篩檢試驗(yàn)陽(yáng)性，但RIBA證實(shí)為假陽(yáng)性(陰性)或不確定的比例與血清流行率呈負(fù)相關(guān)。
對(duì)于每一個(gè)研究組，篩檢試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性且RIBA陽(yáng)性的比例隨著篩檢陽(yáng)性的平均s／co比值的增加而增加。在這些數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上，不同血清流行率人群中篩檢試驗(yàn)陽(yáng)性≥3.8的平均s／co比值預(yù)測(cè)的RIBA陽(yáng)性的比例高達(dá)95%以上。篩檢結(jié)果陽(yáng)性≥3.8的平均s／co比值預(yù)測(cè)HCV RNA陽(yáng)性的比例也很高，雖然這一比例比RIBA陽(yáng)性的比例略低。
這些結(jié)果表明對(duì)于已注冊(cè)的EIA。報(bào)告平均s／co比值≥3.8篩檢陽(yáng)性的標(biāo)本為抗一HCV陽(yáng)性能在很大程度上預(yù)測(cè)真實(shí)的抗一眥V狀況。報(bào)告抗一HCV結(jié)果前的旁證實(shí)驗(yàn)往往局限于那些平均s／co比值小于3.8的篩檢陽(yáng)性標(biāo)本。這一方法的可行性來(lái)由自其s／co比值小于這個(gè)臨界值的高危人群標(biāo)本的比例有限(2.4%)而得到迸一步的保障，當(dāng)按照推薦的方法對(duì)感染人員進(jìn)行抗HCV檢測(cè)時(shí)，僅有少數(shù)標(biāo)本需要再檢。 clin-lab.com
CIA：對(duì)4組CIA篩檢陽(yáng)性(即VITROS抗一HCv陽(yáng)性反性)的標(biāo)本的s/co比值與RIBA3.0結(jié)果之間的關(guān)系進(jìn)行了評(píng)估。這4個(gè)組包括162名血清抗體流行率極低的自愿獻(xiàn)血者；163名低抗體流行率人員；219名抗體流行率呈中等程度的透析病人和689名抗體流行率高的住院人員。
總的來(lái)講，獻(xiàn)血者中CIA篩檢陽(yáng)性且RIBA檢測(cè)陽(yáng)性標(biāo)本的比例為77.8%；低抗體流行率組為74.2%；透析病人組為86.3%；高抗體流行率組94.5%。在經(jīng)CDC評(píng)估的兩項(xiàng)EIAs檢測(cè)的標(biāo)本中觀察到的s／co比值與RIBA陽(yáng)性之間的直接關(guān)系在CIA檢測(cè)的標(biāo)本中同樣觀測(cè)到。然而，通過(guò)VITROS抗一HCV得到的篩檢陽(yáng)性s／co比值的分布范圍比通過(guò)HCV EIA2.0和HCV ELISA3.0得到的大。因此，能在較高程度上預(yù)測(cè)RIBA陽(yáng)性的s／co比值其自身也高。在應(yīng)用VlTROS抗一HCV時(shí)，≥8的s／eo比值能預(yù)測(cè)95%一98%的篩檢陽(yáng)性標(biāo)本RIBA陽(yáng)性。s/o比值低的CIA標(biāo)本的比例與抗一HCV流行率呈負(fù)相關(guān)(即4.9%的在高流行率組：8.7%的在中等程度流行率組；21.5%在低流行率組)，這些結(jié)果表明對(duì)于FDA批準(zhǔn)的CIA，篩檢陽(yáng)性的旁證試驗(yàn)也可局限于s／co比值低(<8)的標(biāo)本和感染危險(xiǎn)增加的人群，不到5%的標(biāo)本的s／co比值低于這個(gè)臨界值。
實(shí)驗(yàn)室抗一HCV檢測(cè)和結(jié)果報(bào)告程序：所有從事抗一HCV檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)運(yùn)用FDA一注冊(cè)或批準(zhǔn)的抗一HCV試驗(yàn)，并按照制造商的說(shuō)明開(kāi)展初檢。 clin-lab.com
●篩檢陰性(即無(wú)陽(yáng)性反應(yīng))標(biāo)本不需進(jìn)一步檢測(cè)，可報(bào)告為抗一HCV陰性。
●篩檢陽(yáng)性標(biāo)本需要進(jìn)行血清學(xué)和核酸旁證試驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)1)根據(jù)篩檢陽(yáng)性s／co比值確定旁證試驗(yàn)，2)對(duì)所有篩檢結(jié)果陽(yáng)性的標(biāo)本進(jìn)行的旁證試驗(yàn)。一對(duì)于需要進(jìn)行旁證試驗(yàn)的篩檢陽(yáng)性標(biāo)本，在得到旁證試驗(yàn)結(jié)果前不得報(bào)告抗一HCV結(jié)果。
根據(jù)篩檢陽(yáng)性s／co比值的旁證試驗(yàn)：
●實(shí)驗(yàn)室只能使用經(jīng)評(píng)估用于此項(xiàng)目的篩檢試驗(yàn)，這種試驗(yàn)的高s／co比值已證實(shí)能預(yù)測(cè)檢測(cè)當(dāng)時(shí)所有受檢人群中95%以上的旁證試驗(yàn)陽(yáng)性結(jié)果。
●篩檢陽(yáng)性且s／co比值高的標(biāo)本可報(bào)告為抗一HCV陽(yáng)性，不需要旁證試驗(yàn)。
●結(jié)果報(bào)告應(yīng)附有旁證試驗(yàn)未進(jìn)行的注釋，其內(nèi)容包括s／co比值高的標(biāo)本通常(95%)確定為陽(yáng)性，但每100份這樣的標(biāo)本中，不到5份為假陽(yáng)性。應(yīng)通知送檢醫(yī)師需要進(jìn)行更為特異的試驗(yàn)，如果需要的話。
●篩檢試驗(yàn)陽(yáng)性且s／co比值低的標(biāo)本應(yīng)進(jìn)行旁證試驗(yàn)，一般選擇RIBA。
所有篩檢陽(yáng)性標(biāo)本的旁證試驗(yàn)：
●僅需RIBA；或
●NAT，如NAT試驗(yàn)為陰性，隨后應(yīng)進(jìn)行RIBA。選擇旁證試驗(yàn)時(shí)應(yīng)考慮血清學(xué)旁證試驗(yàn)
●RIBA可用篩檢試驗(yàn)的同一標(biāo)本進(jìn)行。
●RIBA是證實(shí)篩檢陽(yáng)性且s／co比值低標(biāo)本抗一HCV狀態(tài)效益最好的方法。. 臨床實(shí)驗(yàn)室
●RIBA結(jié)果用來(lái)報(bào)告抗一HCV結(jié)果。核酸旁證試驗(yàn)
●NAT可在具有專項(xiàng)設(shè)施的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。
●血清或血漿標(biāo)本應(yīng)按適合NAT的方式采集、加工、保存，以減少假陽(yáng)性結(jié)果的產(chǎn)生。
●由于試驗(yàn)的變異性，嚴(yán)格的質(zhì)量保證和控制應(yīng)成為開(kāi)展這種試驗(yàn)的臨床實(shí)驗(yàn)室的操作標(biāo)準(zhǔn)。
●建議進(jìn)行熟練程度的試驗(yàn)，包括監(jiān)視假陽(yáng)性結(jié)果。
●如果Hcv RNA結(jié)果陽(yáng)性。可報(bào)告為存在活動(dòng)性HCV感染和抗一HCV陽(yáng)性
●HCV RNA結(jié)果為陰性時(shí)，需進(jìn)行RIBA，RIBA結(jié)果可用作抗一HCV結(jié)果報(bào)告。
文章來(lái)自臨床實(shí)驗(yàn)室儀器信息網(wǎng)(www.Clin-Lab.Com) - 詳文鏈接：http://www.clin-lab.com/html/zhuanti/yigan/201003/28-19206.html |
