lonza 無血清培養(yǎng)基 (點擊標題進入)
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概述
腫瘤細胞的原代培養(yǎng)與正常細胞的原代培養(yǎng)的條件基本相似。一般常用原代細胞的基礎(chǔ)培養(yǎng)基,10%血清濃度即可,在原代培養(yǎng)時需加入原代細胞培養(yǎng)的特制添加物,或原患者血清(1%-2%)以利細胞生長。用細胞生長因子如胰島素、氫化可的松、雌激素等等。也可以考慮動物媒介培養(yǎng)。,根據(jù)細胞種類不同選用不同的促細胞生長因子。腫瘤組織分離為腫瘤細胞原代培養(yǎng)的方法主要有組織塊法、酶消化法、鉭網(wǎng)法、脫落細胞法等。
1.組織塊法
將取得的瘤組織去除脂肪、結(jié)締組織及壞死部分,在平皿中用Hanks液洗3次,剪碎組織,切成1-2mm3 小塊,接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,37℃、5%CO2 或加蓋并塞在普通恒溫箱中培養(yǎng)。
2.酶消化法
在剪碎組織,切成1-2mm3 小塊中,加入0.25%胰蛋白酶或2000U/ml膠原酶,在37℃水浴中消化30min或更長一些,去除消化液,用洗液洗3次,培養(yǎng)基洗1次后,用完全培養(yǎng)基懸浮,并用吸管吹打分散制成細胞懸液,計數(shù)。以(5-10)x108 個/L細胞濃度,在含有10%小牛血清的RPMI、EagleMEM或DMEM中,在37℃、5%CO2 下分瓶(或皿)中培養(yǎng)。
3.鉭網(wǎng)法
在一張面積約為1cm2 的鉭網(wǎng)上放入上述剪碎的一塊或幾塊腫瘤組織塊(1-2mm3 大?。描囎虞p壓,使其粘于網(wǎng)上,再把鉭網(wǎng)放入培養(yǎng)皿中,使網(wǎng)下的組織塊與皿壁緊緊接觸,于37℃、5%CO2 下培養(yǎng),每隔2-3天換液一次,5天后可見有上皮細胞從網(wǎng)上移出,并能在相當于腫瘤組織部位形成純凈的單層上皮細胞。
4.脫落細胞法
將新鮮的腫瘤組織去除脂肪和結(jié)締組織,洗液洗2次后,用刀片將腫瘤組織切成細薄片,在切割的同時有許多上皮細胞脫落下來,脫落細胞經(jīng)洗滌后,加入完全培養(yǎng)基,便可獲得較純的上層細胞,于培養(yǎng)瓶(或皿)中,37℃、5%CO2 下培養(yǎng),每隔2-3天換液一次,7-10天上皮細胞逐漸長成單層。
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